[发明专利]多种真菌毒素快速联合检测试剂盒及其制备和使用方法

说明书

技术领域：

本发明涉及多种真菌毒素快速联合检测试剂盒及其制备和使用方法，属于食品安全检测领域。

背景技术：

真菌毒素是由产毒真菌在适宜的环境条件下产生的有毒代谢产物，具有强毒性和致癌性，能够污染几乎所有种类的食用和饲用农产品。联合国粮农组织的数据显示，世界上约有25%的谷物不同程度地受到真菌毒素的污染而不能食用，不仅在经济上造成了巨大的损失，而且由真菌产生的真菌毒素还能引起人畜中毒，严重时甚至可以致癌。

一种真菌可以产生多种不同的真菌毒素，不同的真菌可以产生相同的真菌毒素。目前已知能产生真菌毒素的真菌有150余种，产生的真菌毒素约有300种。真菌的生长和繁殖都需要一定的温湿度条件，最适宜生长温度一般为20～30℃，霉菌繁殖产毒的最适温度为25～30℃。其中曲霉菌属最适宜生长温度为30℃左右，青霉菌属为25℃左右，镰刀菌属一般为25℃左右。当真菌处于干燥低温或处于与其他真菌竞争的应激情况时，就会产生霉菌毒素，由于真菌生长有一定的地域性，因此，不同区域占优势的真菌毒素种类也不同。由于受气候、种植方式、贮藏条件和消费习惯等影响，我国农产品受真菌毒素污染危害更为严重。真菌毒素防控已成为保障我国乃至世界粮食安全、食品安全和环境安全的迫切需求。

呕吐毒素（简称DON即脱氧雪腐镰刀菌烯醇），人畜长期食用低剂量的霉变玉米，毒素会在体内沉积，构成健康危害。特别是对动物而言，毒素会在动物肌肉组织中有很高含量残留，而正常烹饪过程不会对毒素有破坏，因此可以通过动物组织对人类健康构成危害。现在，社会已经注意到药物残留带给人们的危害，而毒素残留的危害远比药物残留危害严重得多，却还没引起人们足够的重视。

赭曲霉毒素A是一种肾脏毒素，并具有致畸、致癌及免疫毒性的真菌毒素。理化性质稳定，人体摄入后主要导致肾脏病变，是一种慢性进行性疾病，往往造成死亡。尸检症状肾脏明显缩小、肾间质纤维化及肾小管变性等，肾盂癌、输尿管癌于此毒素有关。

玉米赤霉烯酮理化性质稳定，玉米中污染最普遍。它是非固醇类、具有雌性激素性质的真菌毒素，主要作用于生殖系统，母猪最敏感，可引起不育症、流产等。未见引起人类中毒的报道，但与雌性激素相关的人类疾病可能与该毒素有关。

为应对真菌毒素的严重危害，100多个国家或地区制定了相应的限量标准和法规，加强残留的检测及监控，建立有效的残留检测方法势在必行。针对这种情况，急需建立一种快速、简便的真菌毒素类残留快速检测方法。目前真菌毒素的检测技术主要有色谱技术和免疫分析技术等。色谱技术为经典技术，主要有高压液相色谱（HPLC），液相色谱质谱连用(LC-MS)，气相色谱-质谱连用(GC-MS)等，这些方法灵敏准确，但样品处理烦琐费时，成本高，而且需要有经过专业培训的专业人员来操作复杂的仪器设备。而免疫分析技术具有敏感、特异、快速的特点，胶体金免疫层析技术是目前最主要的快速分析方法之一，研制成可以商品化的快速检测产品，可以准确检测出样品中的真菌毒素，对于食品安全现场检测、监控具有重要的意义。胶体金技术自上世纪八十年代应用到医学领域作为POCT的检测手段，本世纪初又引入食品安全检测领域，传统的胶体金检测法将胶体金颗粒标记到多孔滤膜上制成胶体金垫，再固定在检测板上制成检测试纸。但胶体金垫在实际使用中存在一定弊端，如胶体金垫释放的速度太慢、硝酸纤维素膜的疏水性会阻碍金标液顺畅的流动等。此外，粮食、饲料等固体样品使用前要进行样品前处理，前处理手段的复杂会影响整体检测的效率。

发明内容：

为解决上述技术问题，本发明的目的一是在于提供一种简便、灵敏、价格低廉的呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A三种真菌毒素快速联合检测试剂盒，本发明目的二是提供使用上述试剂盒的制备方法，本发明目的三是提供使用上述的试剂盒进行呕吐毒素-BSA、玉米赤霉烯酮-BSA、赭曲霉毒素A毒素检测的使用方法。

为了实现本发明的第一个目的，本发明采用了以下技术方案：