[发明专利]早期膀胱癌血清miRNAs特异表达谱及诊断模型

说明书

技术领域

本发明涉及早期膀胱癌血清miRNAs特异表达谱，其逆转录引物和检测引物，以及诊断模型，属于医学诊断技术领域。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，在我国其发病率和死亡率均居泌尿系统肿瘤的首位，且近年有逐渐上升的趋势。20％-30％的膀胱癌病人初诊时已发生肌层浸润，而在最初诊断为非侵袭性膀胱癌的病人中，约15％的膀胱癌病人五年内发展为侵袭性膀胱癌。因此，早期诊断和早期治疗是改善膀胱癌预后、降低死亡率的关键。目前，用于膀胱癌的诊断方法主要包括膀胱镜、尿脱落细胞学及影像学检查等。膀胱镜检查虽然具有较高的诊断效能，但该检查方法的有创性限制了其在膀胱癌筛查中的广泛应用；尿液脱落细胞学检查虽特异性较高，但敏感性较低，尤其对低分级肿瘤的敏感性仅为20％～40％，且易受监测这主观因素的影响；CT和超声检查不易发现膀胱内较小的病变，对膀胱癌分期预测具有一定的有限性。寻找临敏感性高和特异性高的早期肿瘤标志物，建立一种安全有效的血清学膀胱癌诊断方法是临床亟待解决的难题。

MicroRNA(miRNAs)是一类广泛分布于真核生物的高度保守的、非蛋白编码的单链小分子RNAs，通过对靶mRNA降解或翻译抑制，在转录后水平调节靶基因的表达，进而调控细胞分化、生长、代谢和凋亡等功能。以往研究证实，miRNAs在肿瘤中异常表达，与肿瘤的发生、发展、转移和预后存在密切的联系。近年来研究发现，血清中存在丰富且稳定的miRNAs，通过对比分析肿瘤患者和对照组血清中miRNAs表达谱，发现不同肿瘤具有其特定的miRNAs表达谱，为肿瘤的无创性早期诊断提供了新的依据。因此，确定膀胱癌miRNAs特异表达谱，筛选差异表达的miRNAs，建立膀胱癌血清miRNAs诊断模型，有助于实现对膀胱癌的早期诊断。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供了膀胱癌患者血清miRNA特异表达谱，及其逆转录引物和检测引物、检测试剂盒，以及诊断模型，为临床上膀胱癌的早期发现和早期治疗提供支持。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种早期膀胱癌miRNAs特异表达谱，由上调表达的miR-152,miR-148b-3p以及下调表达的miR-3187-3p，miR-15b-5p,miR-27a-3p，miR-30a-5p构成。

所述miRNAs来自外周静脉血的血清。

所述膀胱癌miRNAs特异表达谱中特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物，如下：

((1)miR-152的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQIDNO：1所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO：2所示：

SEQIDNO：1：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCAAGTTC-3’；

SEQIDNO：2：5’-ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATGACAGA-3’；

(2)miR-148b-3p的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQIDNO：3所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO：4所示：

SEQIDNO：3：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAAAGTT-3’；

SEQIDNO：4：5’-ACACTCCAGCTGGGTCAGTGCATCACAGAA-3’；

(3)miR-3187-3p的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQIDNO：5所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO：6所示：

SEQIDNO：5：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCCGCGCAG-3’；

SEQIDNO：6：5’-ACACTCCAGCTGGGTTGGCCATGGGGCT-3’；

(4)miR-15b-5p的逆转录引物和前向检测引物：逆转录引物的序列如SEQIDNO：7所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO：8所示：

SEQIDNO：7：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTGTAAACC-3’；

SEQIDNO：8：5’-ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACATCATGG-3’；