[发明专利]出血性大肠杆菌O157:H7量子点荧光免疫层析定量检测试纸条及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种出血性大肠杆菌O157:H7量子点荧光免疫层析定量检测试纸条及其制备方法和检测方法，属于荧光免疫检测技术领域。

背景技术

食源性病原微生物是当今世界上不断增多的食品安全和突发性公共卫生事件的主要诱因。据WHO估计，食源性疾病的漏报率在95%以上，其中因动物源性食品污染病原微生物而引起的感染和食物中毒超过85%。在食源性病原微生物中，肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）占有重要地位，EHEC主要包括O157:H7、O26:H11和O111，O157:H7是出血性肠炎的主要致病菌^[1]。

O157:H7感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加剧病情等特点。人感染O157:H7后，出现急性腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），在5%~10%的病例中引发溶血性尿毒综合征（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡。1982年O157:H7首先在美国发现，此后在世界各地散发或地方流行。1996年在日本大阪地区发生O157:H7流行，患者逾万，死亡11人。2001年在中国江苏、安徽等地发生了多次食源性感染O157:H7事件，导致177人死亡。O157:H7已成为全球性的公共卫生和食品安全问题。

人主要是经食源性或与带菌动物接触感染O157:H7，带菌动物的粪便是污染环境和食品的主要来源。从腹泻患者及畜禽粪便、市售肉类以及从猪、鸽、牛、鸡、鸭等动物中有分离到E. coli O157:H7的报道。目前，国内外已报道的检测方法包括:多重PCR、基因芯片、脉冲场凝胶电泳分析、生物传感器、乳胶凝集试验、胶体金免疫层析检测试纸条等，这些方法在检测方面各有所长，但大多对仪器设备要求较高，并且存在试剂供应不配套等问题，因此使用范围有很大的局限性。分离培养鉴定仍是检测O157:H7的金标准，但其通常需要数天才能得到结果，不能满足快速诊断的要求。

近年来，量子点是最重要的纳米材料之一，经常被用作生物标记及成像过程中的光学探针，在生物影像和食品安全中得到广泛关注。量子点（QDs），又称无机半导体纳米晶体，是一类由II-VI族（如CdSe、CdTe、CdS、ZnSe等）或III-V 族（如InP、InAs等）元素组成的纳米颗粒，是近年发展起来的一种新型荧光纳米材料。与传统有机荧光染料相比，具有很多优良的荧光性能，吸收光谱宽、发射光谱窄而对称，斯托克斯位移（Stoke’s shift）大及较高的荧光稳定性和较长的衰减寿命。

中国专利文献CN103376320A公开了一种利用量子点检测大肠杆菌O157:H7的试纸条，利用的是多克隆抗体，不能进行定量检测；而本专利应用的抗体为单克隆抗体，来自于纯化的杂交瘤细胞，单克隆抗体理化性状高度均一、稳定性和重复性好、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于质量控制；并且本专利不但可以对出血性大肠杆菌O157:H7进行定性检测，而且可以进行准确定量检测。

发明内容

为克服上述专利及现有技术的不足，本发明要解决的技术问题是于提供一种出血性大肠杆菌O157:H7量子点荧光免疫层析定量检测试纸条，为快速检测出血性大肠杆菌O157:H7，为食源性致病菌快速诊断提供可靠依据。该定量检测试纸条采用量子点标记的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体D3 做探针，包被出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体E7 和羊抗小鼠IgG 的双抗体夹心法检测出血性大肠杆菌O157:H7，可供食品安全检测机构、食品生产加工企业等机构进行出血性大肠杆菌O157:H7的快速诊断。

同时，本发明还提供出血性大肠杆菌O157:H7量子点荧光免疫层析定量检测试纸条的制备和检测方法。