[发明专利]靶向参与脂肪酸生物合成的植物基因的工程改造锌指蛋白

权利要求书

1.一种调控外源植物脂肪酸硫酯酶B(FatB)基因中至少一种表达的非天然存在的锌指蛋白，其特征在于，所述锌指蛋白包含下述顺序为F1-F6六种指蛋白的六种锌指识别区域：

(i)F1:RSDNLSA(SEQ ID NO:75)；

F2:QSAHRKT(SEQ ID NO:76)；

F3:RSDDLSK(SEQ ID NO:21)；

F4:QSSHRKT(SEQ ID NO:77)；

F5:RSDHLSV(SEQ ID NO:78)；和

F6:QNAHRIE(SEQ ID NO:79)；或

(ii)F1:RSDNLSA(SEQ ID NO:75)；

F2:QSAHRKT(SEQ ID NO:76)；

F3:RSDDLSK(SEQ ID NO:21)；

F4:QSSHRKT(SEQ ID NO:77)；

F5:RSDHLSK(SEQ ID NO:80)；和

F6:QNANRIT(SEQ ID NO:81)；或

(iii)F1:RSDHLST(SEQ ID NO:82)；

F2:HSNTRKN(SEQ ID NO:83)；

F3:RSDHLSQ(SEQ ID NO:84)；

F4:NSASRKN(SEQ ID NO:85)；

F5:QSGNLAR(SEQ ID NO:16)；和

F6:QSGHLSR(SEQ ID NO:86)；或

(iv)F1:NSDSLTE(SEQ ID NO:87)；

F2:RRADLSR(SEQ ID NO:88)；

F3:RSDSLSA(SEQ ID NO:89)；

F4:QNAHRKT(SEQ ID NO:90)；

F5:RSDHLSQ(SEQ ID NO:84)；和

F6:RNADRIT(SEQ ID NO:91)，

其中所述锌指蛋白结合靶位置，所述靶位置包含SEQ ID NO:47-52中所示靶位置的至少两种亚靶位置。

2.一种融合蛋白，其特征在于，所述蛋白包括权利要求1所述的锌指蛋白和转录调节结构域或切割结构域。

3.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述转录调节结构域是活化结构域或抑制结构域。

4.如权利要求1-3中任一所述的锌指蛋白或融合蛋白，其特征在于所述FatB基因包含在芸苔属植物中。

5.如权利要求4所述的锌指蛋白，其特征在于，所述锌指蛋白结合如表10A所示的靶位。

6.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1-5中任一项所述的一种或多种锌指蛋白或融合蛋白。

7.一种修饰参与植物细胞的一种或多种FatB基因的方法，所述方法包括：

将含如权利要求6所述的至少一种多核苷酸的一种或多种表达载体在所述一种或多种锌指蛋白表达且所述一种或多种FatB基因被修饰的条件下导入所述植物细胞。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述修饰包括调控至少一种FatB基因的表达。

9.如权利要求8所述的方法,其特征在于，至少一种FatB基因的表达被活化。

10.如权利要求8所述的方法,其特征在于，至少一种FatB基因的表达被抑制。

11.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述多核苷酸编码锌指核酸酶且至少一种FatB基因被切割。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将包含供体核酸的多核苷酸导入的步骤，从而所述供体核酸通过同源重组导入切割位置。