[发明专利]一种川芎内酯的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取分离技术领域，尤其涉及一种川芎内酯的分离制备方法。

背景技术

川芎是伞形科蒿本属植物川芎(LigusticumchuanxiongHort.)的根茎，始载于《神农本草经》，其性温，味辛。微苦，具有活血行气、祛风止痛功效；主治血瘀气滞所致月经不调，痛经经闭，肝郁气滞而致血行不畅的胸胁疼痛、头痛、风寒湿痹、跌打肿痛等。川芎中主要含有川芎内酯类、生物碱和有机酸类等化学成分，其中动物实验证明川芎药材能够进入大鼠血浆中的主要成分是川芎内酯类化合物和阿魏酸，而阿魏酸广泛存在于植物界，并不是川芎的特征性成分。而川芎内酯类化合物的药理作用研究与川芎传统应用的临床效果一致，所以川芎内酯类化合物是川芎的特征性成分和主要有效成分。故近年来对川芎中川芎内酯的分离及药理作用研究越来越多。

目前，从川芎中分离川芎内酯主要采用组合色谱法(包括反复硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱法)、高速逆流色谱法等方法进行分离纯化。国内外很多学者对川芎中内酯类化学成分进行了研究，王普善等从川芎中分得藁本内酯、新川芎内酯、洋川芎内酯、3-丁基苯酞、3-亚丁基苯酞。北京制药工艺研究所的研究人员分离得到4-羟基-3-丁基苯酞，即川芎酚(chuanxiongo1)。温月笙等分离得到3-丁基-3-羟基-4,5-二氢苯酞。王文祥等从川芎中首次分离得到4,7-二羟基-3-丁基苯酞。NatioTakashi等先后从川芎中分离得到洋川芎内酯B，C，D，E，F，G，H，I，J，M，N，O，P，Q，R，S。KobayashiM等从中分得洋川芎内酯K、L。Kaouadji等从川芎中分得藁本内酯二醇。肖永庆等分离得到Z,Z’-6,6’,7,3'α-二聚藁本内酯、Z-6,8’,7,3'-二聚藁本内酯、Z’-3,8-二氢-6,6’,7,3’α-二聚藁本内酯。金灯萍等先从川芎中提取挥发油，然后用反复硅胶柱色谱法进行分离，得到蒿本内酯纯品。文章“应用高速逆流一次性分离川芎中的蛇床内酯A和Z-蒿本内酯”，作者应用高速逆流色谱技术分离川芎中内酯类成分，结果得到了蛇床内酯A和Z-蒿本内酯两个单体。上述分离方法各有优缺点，组合色谱法不仅操作复杂，溶剂用量大，而且在分离过程中有吸附、损失和污染等现象，使整个分离过程效率不高。

高速逆流色谱(High-SpeedCounter-CurrentChromatography,HSCCC)是近几十年来发展起来的液-液色谱分离技术，利用溶质在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同，将不同物质进行有效分离。此项技术不需要固相载体，只需要被分离物在两相中分配，避免了固相载体带来的大量样品吸附、损失与污染等问题，样品回收率高，预处理及后处理都简单易行，已广泛应用于分离。与其它分离方法相比，它不使用固相载体作固定相，能采用不同的溶剂系统和正反相洗脱方式，克服了固相载体带来的样品吸附、损失、污染、峰形拖尾等缺点。HSCCC可采用不同物化特性的溶剂体系和多样性的操作条件，具有较强的适应性，为从复杂的天然产物粗制品中提取不同特性(如不同极性)的有效成分提供了有利条件。

刘雯等应用高速逆流色谱法一次性分离川芎中的蛇床内酯A和Z-蒿本内酯，称取川芎生药材100g，粉碎成细粉，加入600mL乙醇，加热回流提取，提取3次，每次2h，过滤，减压蒸干，得39g棕黄色浸膏备用。根据分配系数测定的结果，两相溶剂系统采用正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(1:1:1:1)，临用前分开上下相，超声30min。以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，以9mL/min的流速将上相泵入管路，待固定相充满整个管路后，停泵，启动主机，把转速调至892RPM，然后以1.2mL/min的流速泵入流动相。当上下相平衡时，记录固定相流出的体积，计算得到固定相保留值0.53。供试品100mg溶解于50mL流动相，浓度为10mg/mL，进样量为10mL，以1.2mL/min的流速泵入流动相。紫外检测波长为280nm，根据紫外检测谱图，收集各峰的组分，将各峰对应的收集液分别浓缩，干燥。用HPLC及TLC检测。

中国发明专利第200810208206.8号公开了一种高纯度Z-蒿本内酯和蛇床内酯A的制备方法，其采用高速逆流色谱技术，制备川芎或当归粗提物作为进样物；配制构成固定相和流动相同时泵入柱内，再转主机；由进样阀进样；根据检测器图谱接收目标成分，经分离后可得到Z蒿本内酯和蛇床内酯A。