[发明专利]伪狂犬病病毒双荧光标记缺失病毒的构建有效
| 申请号： | 201410234394.7 | 申请日： | 2014-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN103981153B | 公开（公告）日： | 2017-07-07 |
| 发明（设计）人： | 李俊平;陈晓春;杨承槐;李启红;李慧姣;夏业才;吴华伟;邓永;徐微;蔡青秀 | 申请（专利权）人： | 中国兽医药品监察所 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N15/63;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京君智知识产权代理事务所(普通合伙)11305 | 代理人： | 郑明 |
| 地址： | 100081 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 狂犬病 病毒 荧光 标记 缺失 构建 | ||
1.一种伪狂犬病病毒双荧光标记缺失病毒，其特征在于，所表述的伪狂犬病病毒同时缺失了gE基因、gI基因、US9基因和TK基因四种伪狂犬病病毒基因，在基因缺失的部位通过同源重组分别插入GFP基因和RFP基因作为标记物，该毒株被命名为伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus)双荧光标记缺失病毒rPRV/gE-/gI-/US9-/TK-/GFP+/RFP+株，该毒株已于2014年05月06日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.8879。
2.如权利要求1所述伪狂犬病病毒双荧光标记缺失病毒的构建方法，其特征在于该毒株的构建步骤为：
(1)分离和鉴定亲本毒株，命名为PRVSX株；
(2)转移载体的构建，以pMD-18T克隆载体为骨架载体，构建两种转移载体：第一种转移载体为pMD-US6-GFP-US2，插入伪狂犬病病毒gI、gE和US9两端的US6和US2部分基因序列作为同源臂，左右同源臂间插入GFP基因；第二种转移载体为pMD-UL24-RFP-UL22，插入伪狂犬病病毒TK基因两端的UL24和UL22部分基因序列作为同源臂，左右同源臂间插入RFP基因；
(3)双荧光标记缺失病毒的构建，pMD-US6-GFP-US2转移载体与亲本株PRVSX株共转染PK15细胞，通过克隆筛选，获得含GFP标记蛋白的缺失病毒rPRV/gE-/gI-/US9-/GFP+；进而，再与pMD-UL24-RFP-UL22转移载体共转染PK15细胞，通过克隆筛选获得伪狂犬病病毒双荧光标记缺失病毒rPRV/gE-/gI-/US9-/TK-/GFP+/RFP+株。
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