[发明专利]一种毛细管电泳筛选棘白菌素类药物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及棘白菌素类药物筛选领域，具体的说涉及一种毛细管电泳筛选棘白菌素类药物的方法。

背景技术

从活性开始的药物筛选，首先对大量化合物进行活性检测，然后对筛选出来的新化合物(new chemical entities，NCEs)进行结构鉴定和性能测试，根据具体的结果设计下步的优化修饰。虽然高通量药物筛选(High-throughput drug screening，HTS)提高了所筛选化合物的种类和数量，但是，在实际筛选中，从活性开始的研究过程非常慢，耗时长，并且花费巨大。这主要是因为单纯地增加种类和数量，并不一定会同等比例地筛选出更多的活性化合物，大部分只是增大了工作量，浪费了时间、经历和钱财在无效的化合物上。另外由于药物作用是一个复杂的过程，只依靠某个指标进行筛选，获得活性排序，有很大的误导性，而选用不同性能和指标来进行筛选，选定的活性化合物及其排序可能完全不一样，并且单一活性标准筛选出的化合物其他方面不一定适合作为先导化合物。目前有一些方法能够提高该途径获得先导化合物的几率，如限制待筛选物为已知的与相关疾病有关的天然化合物库(植物、微生物代谢物等)中的化合物，如与老年痴呆症有关的乙酰胆碱酯酶，从相关性化合物库中寻找能够影响该酶活性的化合物。与传统的从活性入手筛选方法比，此法筛选速度快。美国Eureka公司和Tang等都从天然产物中筛选了此酶的抑制剂。

从药物结构开始的药物筛选，即找到药物具有活性的核心结构，以该结构为筛选标准，对筛选鉴定或合成的结构类似物，在进行活性测定。该途径的基础在于化合物的药物活性、与机体的相互作用及物理性质归根结底是由其分子结构决定的，这样筛选出来的结构类似物具有了关键性的核心结构，则其理论上就具有了相应的药物活性，接下来可以通过化学修饰增大其药物活性或提高其生物利用度。该法可以大大地提高研发效率。但是这种方法也有其局限性，随着药物研发的高速发展，可供选择的核心化合物越来越少，相应的竞争就越来越激烈。

从药物活性和结构开始的药物筛选方法先以活性药物的核心结构作为抗原，生产出相应的多克隆抗体。然后利用此抗体，从具有相关性能的化合物库中筛选相近化学结构的分子。最后通过化学修饰得到具有独特核心结构的活性化合物。由该方法筛选出来的化合物，结构新颖，性能明确，活性好。Yao等在该方面做了很多研究，首次使用酶联免疫分析(ELISA)的方法从发酵液中发现包括氨基糖苷类、大环内酯类抗菌素以及糖基多肽类等新的天然产物结构。但是由于使用的为ELISA来检测分析，故而具有了ELISA常见的缺点，操作繁琐，多次的洗脱加样也增大了出现假阳性反应的几率。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种毛细管电泳筛选棘白菌素类药物的方法，从药物活性和结构进行筛选，并使用毛细管电泳进行检测，克服现有技术中一般的药物筛选周期长，而且耗费巨大，常出现假阳性反应的问题。

本发明的技术方案是：

一种毛细管电泳筛选棘白菌素类药物的方法，包括以下步骤：

(1)活性核心结构EBN与荧光标记物进行标记反应，标记混合物进行毛细管电泳，计算电泳淌度；

(2)标记混合物与Ab反应，反应后进行毛细管电泳，计算电泳淌度；

(3)标记混合物、Ab、发酵液反应，反应后进行毛细管电泳，计算电泳淌度；

(4)比较电泳淌度差值变化情况，判断是否有竞争结合。

所述步骤(1)中毛细管电泳检测器为激光诱导荧光检测器。

所述步骤(1)中荧光标记物为FITC、罗丹明B、TRITC、吖啶黄或Cy3。

本发明的优点是：本发明利用抗原抗体竞争结合模型和毛细管电泳分离检测手段，建立了一种新型药物筛选方法，并成功筛选出了有效物质，该技术具有较高的选择性和特异性，筛选的对象为特定的化合物库，有助于筛选效率的提高，利用竞争结合模式，有利于发现全新的活性化合物，以往无法侦查漏网的化学分子结构也有重新被发现的可能。CE-LIF技术的应用，提高了方法的检测灵敏度，简化了检测步骤，且通过毛细管电泳的分离性能可以降低筛选过程中假阳性反应发生的可能性，进一步提高筛选效率。

本发明采用从活性和结构两方面入手的新型筛选途径，以抗原抗体竞争结合为模型，使用毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法进行棘白菌素类抗真菌药物的筛选。

附图说明

图1为CE-LIF检测ECB与Ag*竞争结合情况图。

具体实施方式