[发明专利]CST1mRNA和CST4mRNA或其编码的蛋白质在制备膀胱癌标志物中的应用及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于诊断领域，具体涉及Cystatin SN和Cystatin S在制备膀胱癌标志物中的应用，还涉及诊断膀胱癌的试剂盒。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。占我国泌尿生殖系统肿瘤发病率的第一位，而在西方其发病率仅次于前列腺癌，居第2位。2012年全国肿瘤登记地区膀胱癌的发病率为6.61/10万，列恶性肿瘤发病率的第9位。膀胱癌可发生于任何年龄，甚至于儿童。其发病率随年龄增长而增加，高发年龄50～70岁。随着我国老龄化进程加速，膀胱癌发病率呈现逐年上升的趋势。国内大城市中如北京，上海，天津，膀胱癌的发病率已位列男性常见恶性肿瘤的第六位，而死亡率位列第七位。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin SN和Cystatin S是人类Cystatin家族成员，分别由CST1基因和CST4基因编码。Cystatin SN和Cystatin S为典型的分泌蛋白，分布于体液和分泌物中，如眼泪、唾液、血清、血浆等，可以作为乳腺癌标志物。而CST1和CST4在胃肠肿瘤组织中的表达量高于正常组织，并且CST1和CST4的表达与浸润深度、远处转移以及肿瘤分期(TNM分析)相关；生存分析表明，CST1和CST4高表达患者的5年生存率显著高于无表达组；Cox回归分析表明，CST1和CST4是一个独立预后因子；从而提示CST1和CST4可能在胃肠肿瘤的发生、发展过程中发挥类似肿瘤抑制因子的作用。但迄今为止，未见CST1和CST4与膀胱癌相关性的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供CST1mRNA和CST4mRNA在制备诊断和预示膀胱癌标志物中的联合应用，通过CST1mRNA和CST4mRNA联合检测，提高诊断和预示膀胱癌的特异性；本发明的目的之二在于提供CST1mRNA和CST4mRNA联合检测试剂盒，该试剂盒具有特异性高，使用方便等优点；本发明的目的之三在于提供Cystatin SN和Cystatin S在制备诊断和预示膀胱癌标志物中的联合应用。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

1.CST1mRNA和CST4mRNA在制备诊断和预示膀胱癌标志物中的联合应用，所述CST1mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CST4mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选的，CST1mRNA和CST4mRNA联合应用的判断公式为P＝exp(-1.341+0.005a-0.001b)/[1+exp(-1.341+0.005a-0.001b)]，其中a＝CST1拷贝数，b＝CST4拷贝数。

优选的，所述诊断和预示为诊断、疗效评估或转移复发监控。

2、CST1mRNA和CST4mRNA联合检测试剂盒，包括CST1mRNA和CST4mRNA的定量检测试剂；所述CST1mRNA定量检测试剂包括如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的检测引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示的TaqMAN探针；所述CST4mRNA定量检测试剂包括如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的检测引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示的TaqMAN探针。

优选的，所述试剂盒还包括SDHA mRNA定量检测试剂，所述SDHA mRNA定量检测试剂包括如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的检测引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示的TaqMAN探针。

优选的，所述试剂盒还包括特异捕获CST1mRNA、CST4mRNA和SDHA mRNA的磁珠，所述特异捕获CST1mRNA的磁珠结合有如SEQ ID NO.4所示的探针，所述特异捕获CST4mRNA的磁珠结合有如SEQ ID NO.5所示的探针，所述特异捕获SDHA mRNA的磁珠结合有如SEQ ID NO.6所示的探针。

更优选的，靶序列捕获液中磁珠的浓度为500μg/mL，特异捕获探针的浓度为2μM。

优选的，所述试剂盒还包括10×Buffer，dNTP，MgCl₂，DMSO，DTT，Taq酶、UDG、逆转录酶和RNA酶抑制剂。