[发明专利]一种水产鱼皮胶原蛋白水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种水产鱼皮胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：

1)将水产鱼皮胶原蛋白在4℃下不断搅拌的条件下，充分溶于浓度为0.5mol/L的醋酸溶液中，配置成胶原液；

2)将溶解后的胶原液离心，收集上清液，待用；

3)用过滤后的10—15mol/L氢氧化钠溶液调节上述胶原上清液的pH至7.0-7.8；

或，用过滤后的磷酸盐缓冲液与上述胶原上清液按体积比1:1的比例混合，并不断搅拌混合液，而后用过滤后的10—15mol/L氢氧化钠溶液调节混合液的pH至7.0—7.8；

4)将调节pH后的胶原上清液混合液置于模具中，然后在30-40℃水浴静置1-2h，使其充分自聚凝固成型；

5)将成型后的水凝胶从模具中取出，置于超纯水中浸泡20-30min，即得水产鱼皮胶原蛋白水凝胶。

2.按权利要求1所述的水产鱼皮胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述过滤后的磷酸盐缓冲液为浓度为40mM的含浓度为260mM的氯化钠的磷酸盐缓冲液，滤纸过滤，待用。

3.按权利要求2所述的水产鱼皮胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠—磷酸二氢钠缓冲液，pH7.4。

4.按权利要求1所述的水产鱼皮胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述水产鱼皮胶原蛋白为罗非鱼皮酶促溶性胶原蛋白；

1)将清洗并吸干表面水分的罗非鱼皮在磁力搅拌下用10％正丁醇对鱼皮进行脱脂24h，期间每8h更换一次正丁醇溶液；而后清洗待用；

2)于4℃条件下，用0.1mol/L的氢氧化钠对上述处理后鱼皮进行脱杂蛋白24h，期间每8h更换一次氢氧化钠溶液，而后清洗待用；

3)将上述脱杂蛋白后的鱼皮粉碎，粉碎后鱼皮粉与0.5mol/L醋酸溶液按质量比1:50混合，混合后再加入原料鱼皮质量0.5％-1％的胃蛋白酶(750U/mg，Sigma)，而后于4℃下搅拌提取48h；

4)将上述提取后鱼皮提取液离心收集上清液，并在冰水浴及搅拌的条件下向上清液中缓缓加入研磨细碎的氯化钠至终浓度为0.9mol/L，而后将液体置于4℃冰箱中过夜盐析；

5)将上述盐析液离心，收集沉淀，而后将沉淀复溶于0.5mol/L的醋酸溶液中；所得复溶液装于3.5kDa透析袋中，透析24h，透析液0.02mol/L的磷酸氢二钠溶液(pH8.6)；

6)上述所得透析液再用0.1mol/L的醋酸溶液透析24h，透析后再用纯水透析48h；透析后的胶原液于-80℃快速遇冷，然后-60℃冷冻干燥48h，即得罗非鱼皮酶促溶性胶原蛋白(PSC)。