[发明专利]固相萃取液质联用法测定葡萄酒中甲霜灵、多菌灵的方法

说明书

技术领域

本发明涉及产品安全与检测技术领域，具体涉及一种固相萃取液质联用法检测葡萄酒中农残的方法。

背景技术

葡萄酒是由新鲜葡萄或葡萄汁发酵后制得，葡萄酒中富含多种营养物，如氨基酸、维生素、β-谷甾醇、多酚和矿质元素等，适当饮用葡萄酒可以预防疾病，增强人体健康。然而在葡萄的病虫害防治过程中，经常喷施杀虫剂、杀菌剂和除草剂等农药。一般而言，农药的残效期比较长，且伴有一定的毒性，这样残留的农药会通过食物链最终进入人体，给人体健康带来潜在的危害。

随着检测技术及食品质量安全要求的提高，近两年对葡萄酒中农残的报道日益增多。而葡萄在病虫防害中常用到多菌灵、甲霜灵等农药，其中，多菌灵(Carbendazim，MBC)，化学名称为N-(2-苯并咪唑基)氨基甲酸酯，是一种广谱、内吸附性杀菌剂，可以有效预防葡萄白腐病、黑痘病、炭疽病等。甲霜灵(metalaxyl)，属苯基酰胺类高效低毒内吸性杀菌剂，化学名称：D,L-N-(2,6二甲基苯基)-N-(2'-甲氧基乙基)氨基丙酸甲酯，主要应用于葡萄酒霜霉病菌、疫霉病菌和腐病菌的防治，但这两种农药对人体均有致癌或导致遗传性疾病风险，所以研究葡萄酒中甲霜灵、多菌灵可行性检测方法，对维护国内外葡萄酒行业规范及健康发展具有现实意义。

目前对于葡萄酒中农残—甲霜灵、多菌灵等农残项目检测没有具体的国家检测标准或相关专利，文献中报道主要涉及气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法/气质联用法、液相色谱/质谱联用分析法等，前处理方法主要采用液/液萃取(Liquid/liquid extraction,LLE)、加速溶剂萃取(Accelerate solvent extraction,ASE)、固相微萃取(Solid phase microextration,SPME)及固相萃取柱萃取(Solidphase extration,SPE)等，但葡萄酒样品成分杂、基质干扰大，若前处理不当，极易影响检测结果。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供固相萃取液质联用法测定葡萄酒中甲霜灵、多菌灵含量的定量方法，其分析流程包括样品的预处理方法和目标化合物的检测方法，适用于葡萄酒中相关农残的检测，其结果可为葡萄酒中多菌灵、甲霜灵的安全限量控制提供参考。

为了解决前述的技术问题，本发明提供技术方案是：

一种固相萃取液质联用法测定葡萄酒中甲霜灵、多菌灵的方法，包括如下步骤：

(1)绘制多菌灵、甲霜灵的标准曲线

A.分别以多菌灵、甲霜灵标准溶液制成梯度标准系列溶液，

B.调节步骤A中各个溶液pH值，用乙腈进行液液萃取，

C.加入氯化钠，待溶液盐析分层后，用氨基固相萃取柱对乙腈层进行萃取，利用洗脱液对固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液，转入旋转蒸发仪浓缩后用氮气吹干，

D.通过乙腈水溶液回溶后，注入液质联用仪进行分析，获得葡萄酒中甲霜灵、多菌灵的含量，

E.将目标化合物的浓度对色谱峰面积对应，即得到校准后的标准曲线；

(2)以待测葡萄酒样品为试样，采用步骤(1)中A-E的方法，可以得到待测葡萄酒样品中的样品测定值，将该测定值对照标准曲线后，可计算得到葡萄酒中多菌灵及甲霜灵含量。

优选的技术方案是：步骤(1)B中，采用0.5mol/L氢氧化钠调节待测样品酸碱度：调节pH＝8。

优选的技术方案是：步骤(1)C中，采用氨基固相萃取柱萃取，其洗脱条件为：甲苯：乙腈＝3:1，洗脱剂用量15mL，分三次淋洗。

优选的技术方案是：步骤(1)D中，采用80％乙腈水溶液进行回溶。

优选的技术方案是：步骤(1)D中，测定条件为：色谱柱：Inertsil C8，5μm，150mm*2.1(内径)或相当者。流动相为0.3％乙酸水溶液(A)和0.3％乙酸的乙腈溶液(B)梯度洗脱，柱温：30℃。

优选的技术方案是：步骤(1)D中，洗脱液经氮气吹干后，溶解在1mL、80％乙腈水溶液中，取20μL溶液进液质联用仪进行分析。