[发明专利]一种用于促进黄鳝生长的酵母菌干粉、制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明属于渔业科学应用技术领域，具体涉及一种用于用于促进黄鳝生长的酵母菌干粉、制备方法及其用途。

背景技术

黄鳝(Monopterus albus)，俗称鳝鱼，属于硬骨鱼纲、合鳃目、合鳃科、黄鳝属，广泛存在于亚洲地区，中国仅产1种。其体型细，形状似蛇或鳗，营养价值极高。目前已在中国中南部开展大面积的养殖，中国目前的养殖总产量已经达到36万吨，由于其生长快，成活率高以及对网箱养殖条件的适应性好，它被当作中国水产养殖的首选品种之一。鳝鱼肉质细嫩，鲜美可口，营养价值高，具有滋补强身和药用功能，是人们喜爱的滋补水产品，深受中国消费者的青睐。为了繁荣市场，丰富人民生活，发展池塘养殖已变得日益迫切，对黄鳝的生物学特性,生长变化规律等方面的研究已成为重要的课题。近年来其水产养殖发展很快。在水产养殖中高效饵料的研制是增产增收的基本途径。如何捉高饵料转化率，缩短养殖周期，降低生产成本，提高水产养殖品的产量和质量被越来越多的科研工作者和养殖户所关注。

黑色素浓集激素（MCH）是一种由19个氨基酸组成的神经肽,最先于鲑鱼脑垂体腺内分离得到，它通过使黑色素细胞中的黑色素浓集来调节硬骨鱼类的皮肤颜色,因此而得名。MCH在许多生理过程中起作用,包括调节硬骨鱼类皮肤的颜色;调节下丘脑-垂体-肾上腺轴;调节肠道内的水和电解质出入;刺激大鼠神经垂体分泌催产素;调节感觉过程等。而目前研究的重点是MCH在调节进食行为和能量代谢方面的作用。最近一系列研究发现MCH在调节体重方面具有重要的作用:（1）过表达MCH的转基因小鼠抵抗胰岛素且患有肥胖症；（2）在大鼠脑室内注射MCH导致进食过多引发肥胖；（3）基因工程肥胖鼠和禁食小鼠相比下丘脑中的MCH mRNA水平增高；（4）缺乏MCH的小鼠食量减少，代谢率增高，导致体重减轻和脂肪含量下降。这一切都表明MCH具有促进食欲，促进生长的作用。

目前国内外成功率高、效益好的方式多采取网箱高密度投饵养鳝，为了获得较快的黄鳝生长速度从而提高经济效益，渔民主要采用高蛋白饲料进行投喂，一般均采用鱼糜、蚯蚓、鱼粉等进行饲喂，由于世界鱼粉市场供需不平衡, 鱼粉价格不断上扬, 使养殖成本上升, 同时蚯蚓及鱼糜的养殖成本也逐年上升，从而严重制约了水产养殖业的发展。此外随着养殖规模和强度的不断扩大，未食的残饵以及养殖体的排泄物等对养殖水体及周围水环境的影响越来越突出，结果导致鱼病增加，养殖水体富营养化，最终使得黄鳝生长停滞，养殖不能继续。因此寻找一条减少鱼粉等蛋白性饲料的使用并能促进黄鳝生长的配合饲料成为亟待解决的问题。

 

发明内容

本发明的目的在于针对以上现有技术中的不足而提供一种用于促进黄鳝生长的饲料及其制备和实施方法。

本发明是通过以下技术手段实现的：

一种用于促进黄鳝生长的酵母菌干粉，包括表达MCH的酵母菌。

所述的用于促进黄鳝生长的酵母菌干粉，其中表达MCH的酵母菌的制备方法可以为以已克隆的黄鳝MCH 基因为模板, 通过 PCR方法获得 MCH 基因, 将MCH基因与含甲醇酵母的醇氧化酶AOX基因启动子的载体 pHIL-D2 进行体外重组, 构建 pHIL-MCH 酵母整合型质粒；通过电转化将MCH 基因整合到酵母 GS115 的染色体上, 用 PCR 方法筛选阳性转化子, 并用点杂交筛选多拷贝转化子, 经甲醇诱导AOX 启动子, 而使 rMCH 得以表达，从而获得表达MCH的酵母菌。

一种以上所述的用于促进黄鳝生长的酵母菌干粉的制备方法，按照以下步骤进行制备：

（1） 工程菌的培养: 表达MCH的将酵母菌接种于 YPD 平板培养基中, 摇床 30℃条件下培养，挑菌电泳观察有MCH表达的单菌落菌种于已预先灭菌装有YPD培养基的试管中, 30℃摇振培养 ；

（2） 工程菌的扩大培养: 用预先灭菌，装有无机盐培养基的容器，加入上述工程菌培养液, 30℃摇振培养, 培养完毕后分装并保存于-70℃冰箱中备用；

（3） 工程菌中试：取保存于-70℃冰箱中的工程菌, 接种于YPD培养基中, 30℃摇振培养，培养完毕后移至已预先灭菌的接料瓶中, 泵入装有无机盐培养基的发酵罐中进行发酵，其中无机盐培养基预先灭菌并将温度恢复至 30℃，当酵母生长至 OD600为30-45时, 每天加入体积分数为发酵液量0.5%-1%的甲醇诱导4-5天，收集菌液, 采用低温超声波法进行降解酵母细胞壁，于4℃冰柜中沉淀, 去上清液, 沉淀物置于冷冻干燥机中干燥，即得用于促进黄鳝生长的酵母菌干粉。