[发明专利]检测磷脂酶A2

说明书

本发明提供一种检测磷脂酶A2活性的囊泡及其制备方法和应用该囊泡检测磷脂酶A2活性的方法，以1‑萘酚为英冠探针，分别测定450nm及360nm处的荧光强度并获得两者的比值，在标准曲线中读取相应的酶活性度数即可。本发明使用的探针分子简单且价格便宜，其特殊的性质非常适合与磷脂参与的囊泡类型的底物结构和酶催化反应的测定。同时，本发明的检测方法稳态光谱、寿命与酶活性相关性良好，两种方法所得结果比较匹配。

技术领域

本发明涉及磷脂酶A2活性的检测，具体而言是一种检测磷脂酶A2活性的囊泡及其制备方法和应用该囊泡的荧光探针检测磷脂酶A2活性的方法。

背景技术

磷脂广泛存在于自然界所有动植物机体中，是生物膜的主要组成部分。而对磷脂的代谢过程研究，例如磷脂酶的水解，在生物化学领域中有着重要作用。

磷脂酶A2(PLA2)是一类催化磷脂二位酰基(Sn2)水解的酶族，其广泛存在于细菌、植物、哺乳动物的组织、细胞和分泌物中，具有产生二十烷酸类炎性介质、参与磷脂重建、肺泡表面活性物质代谢、细胞信号传递、宿主反应、促进血液凝固等作用。研究证明，磷脂酶A2在肺脏、心血管、胃肠道、皮肤、骨骼等系统的急、慢性炎症性疾病中，磷脂酶A2活性均有增高并介导一系列病理生理过程。因此，磷脂酶A2活性的检测可作为早期预报病理进程及诊断性指标。

目前，磷脂酶A2活性的检测法主要有：滴定法、放射标记法、分光光度法以及荧光分析法。滴定法是保持体系pH值稳定条件下，采用碱滴定磷脂酶A2水解卵磷脂生成的自由脂肪酸浓度，通过消耗的碱的量来确定磷脂酶A2的活性。作为滴定标准液的碱可用溶有咪唑.SO2和I2的甘油-甲酯，这是一种连续检测方法，它可以探测自然底物卵磷脂的水解。放射性检测需要合成被放射性元素标记的卵磷脂，这些卵磷脂都可以买到，但通常十分昂贵，且灵敏度依赖于标记底物的特定的放射性。分光光度法与荧光分析法使用最为广泛，通常选择体系灵敏的探针或标记物，对其光谱性质进行检测。

上述各方法均存在不同的问题：滴定法灵敏度不高；放射标记法灵敏度非常高，但是需要有放射性元素标志的磷脂，通常十分昂贵；分光光度法与荧光分析法使用最为广泛，但是通常情况下使用的标记物、探针比较昂贵或者灵敏度不够。

因此，我们需要一种新的磷脂酶A2活性的检测法，灵敏度高且易于操作又经济实惠。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出一种检测磷脂酶A2活性的囊泡及其制备方法和应用该囊泡中的荧光探针检测磷脂酶A2活性的方法。

为实现上述目的，所采取的技术方案是：一种检测磷脂酶A2活性的囊泡，具有由卵磷脂和胆固醇分子构成的双分子层，在所述双分子层中包封有荧光探针分子。

在本发明一实施例中，所述荧光探针为1-萘酚。

在本发明一实施例中，所述卵磷脂、胆固醇的质量比为3:1。