[发明专利]C-BF保护小鼠及人结肠癌上皮细胞系溃疡性结肠炎综合模型

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及C-BF抗菌肽对UC小鼠的保护作用。 

背景技术

IBD是炎症性肠疾病的简称，包括溃疡性结肠炎和节段性结肠炎，其病理机制尚不清楚。IBD被定义为慢性复发性胃肠道炎症。最近有研究表明，各种免疫，遗传和环境因素会影响结肠炎的萌生、进展。在西方国家IBD的发病率更高，然而，由于西方生活方式的影响IBD在世界上其他地区的发病率也越来越高。溃疡性结肠炎，是一种与结肠粘膜表面炎症相关的慢性胃肠疾病，人感染溃疡性结肠炎可能转变成人类的第三大恶性肿瘤——大肠癌。 

抗菌肽有两大家族：Cathelicidin和β-防御素，前者已具备先天免疫反应防止宿主感染微生物的抗菌功能。起源于Cathelicidin的抗菌肽具有抗菌、抗病毒和抗真菌作用。Cathelicidin中广泛报道的抗菌肽LL-37来源于人，而mCRAMP是鼠源抗菌肽，代表鼠种。Cathlicidin-BF，来源于金环蛇，是一种新的抗菌肽，据报道C-BF具有广谱抗菌活性，特别是对革兰阴性细菌。Cathlicidin-BF可以成为寻常性痤疮的有效治疗药物(plos one)。迄今为止，C-BF的非抗菌活性机制导致的其他潜在生物医学功能研究尚处于空白阶段。 

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是通过活体小鼠模型和体外Caco-2细胞和小鼠巨噬细胞模型检测Cathelicidin-BF调节DSS诱导的结肠炎的作用。研究结果显示结肠给药外源性Cathelicidin-BF显著降低DSS引起的炎症反应和肠屏障功能的损害。体内和体外结果结合，我们还发现Cathelicidin-BF可以通过抑制NF-κB通路的激活降低DSS引起的炎症。目前，IBD的治疗主要是仅限于暂时性缓解炎症反应，而且，结肠炎症最终极有可能导致结肠癌，因此，我们迫切需要一个更安全和更有效的治疗和预防IBD的药物，抗菌肽作为一个潜在的抗生素替代品可能是理想的选择。 

一种抗菌肽C-BF保护小鼠及人结肠癌上皮细胞系溃疡性结肠炎综合模型， 

1)对于小鼠，建立3％葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎模型；小鼠直肠注射C-BF的PBS溶液，每天一次，C-BF的剂量是5mg/kg，注射持续1周，实验期每天称重记录体重数据，并观察小鼠直肠出血，粪便成型情况； 

2)对于Caco-2细胞，培养基中抗菌肽C-BF的浓度为25ug/ml，抗菌肽处理Caco-2细胞 24h后用3％DSS处理24h；进一步， 

3)对于小鼠，荧光标记C-BF，浓度为2mg/ml，直肠注射，通过活体成像、HE染色、免疫荧光、免疫组织化学、流式细胞仪、Tunnel、ELISA、利用细胞电阻仪对跨上皮电阻值进行测定、western-blot、实时荧光定量PCR技术方法； 

4)对于Caco-2细胞，利用细胞电阻仪对跨上皮电阻值进行测定，Western-blot、实时荧光定量PCR技术方法； 

5)综合体内小鼠实验和体外细胞实验，评价C-BF在缓解炎症、降低细胞凋亡水平以及改善肠道屏障功能的作用。 

本发明的有益效果在于：