[发明专利]一种碳-13同位素标记的溴化膦化合物及制备方法和应用

权利要求书

1.一种碳-13同位素标记的溴化膦化合物，其特征在于，结构式(I)如下：

2.一种溴化膦化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)在无水丙酮中，间苯三酚与¹³C标记的硫酸二甲酯在催化剂无水碳酸钾作用下回流反应，生成(1′,1″,1″′-¹³C₃)-1,3,5-三甲氧苯；

2)无水无氧条件下，(1′,1″,1″′-¹³C₃)-1,3,5-三甲氧苯与重蒸过的三氯化磷在无水氯化锌作用下回流反应，生成三[(1′,1″,1″′-¹³C₃)-2,4,6-三甲氧苯基]膦；

3)在无水二氯甲烷冰浴中，溴乙酰溴与N-羟基琥珀酰亚胺在吡啶作用下，生成溴乙酸-N-琥珀酰亚胺酯；

4)溴乙酸-N-琥珀酰亚胺酯与三[(1′,1″,1″′-13C3)-2,4,6-三甲氧苯基]膦反应得到式(I)结构的目标产物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中，所述¹³C标记的硫酸二甲酯需每隔10-15分钟加入其总用量的1/4。

4.一种蛋白质定量分析试剂，其特征在于，由权利要求1所述的结构式(I)溴化膦化合物制得。

5.权利要求4所述蛋白质定量分析试剂在多肽从头测序及蛋白质定量分析中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述多肽从头测序及蛋白质定量分析方法包括如下步骤：

1)蛋白酶解；

2)TMPP正电荷衍生：

取两份标准蛋白BSA酶解肽段产物分别加入C12-TMPP-Ac-OSu试剂和C13-TMPP-Ac-OSu试剂，再各加入碳酸氢钠缓冲液，反应15-30分钟，加入三氟乙酸终止反应，反应产物分别命名为C12-TMPP标记和C13-TMPP标记；

3)将C12-TMPP标记与C13-TMPP标记分别按照1:1比例混合；

4)质谱分析：

取1pmol混合后的正电荷衍生后肽段样品进行质谱分析，对含有两种不同标记物的同一多肽在质谱中出现的两个信号峰强度进行定量分析。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肽段样品的梯度洗脱条件：B溶液经过6分钟的线性梯度从5％升到17％，再经过75分钟线性梯度从17％升到25％，流量为500纳升每分钟。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述质谱分析条件：毛细管的温度为200度，喷雾电压为2千伏，离子透镜值为250。