[发明专利]一种丁香假单胞菌及其筛选方法和在杀灭线虫中的应用

权利要求书

1.一种丁香假单胞菌在杀灭线虫中的应用，其特征在于，丁香假单胞菌分类命名为丁香假单胞菌MB03(Pseudomonas syringae MB03)，保藏日期为：2014年4月2日，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏中心保藏编号：CCTCC NO:M 2014114；所述丁香假单胞菌MB03形态及生理生化特征包括：在LB固体培养基上菌落突起，呈乳白色，菌体镜检呈杆状，为革兰氏阴性菌；应用方法是：以丁香假单胞菌MB03的发酵上清液，和/或细胞破碎液，和/或丁香假单胞菌MB03经硫酸铵沉淀后的胞外粗蛋白和/或胞内粗蛋白对秀丽隐杆线虫和南方根结线虫进行杀灭。

2.根据权利要求1所述的丁香假单胞菌在杀灭线虫中的应用，其特征在于，丁香假单胞菌MB03菌体制备方法是：将丁香假单胞菌MB03菌种划线接种到LB固体培养基上培养，温度为28℃，培养时间为12h；然后从上述固体培养基中挑取单菌落丁香假单胞菌MB03菌种装入有5mL的LB液体培养基的PA瓶中经28℃，160r·min^-1培养10h；然后将丁香假单胞菌扩大培养，就是将上述PA瓶中活化的丁香假单胞菌MB03菌种按体积比1％的接种量转接到装有200mL的LB液体培养基的三角瓶中进行28℃，160r·min^-1扩大培养24h；然后以12000r·min^-1离心3min，沉淀即为丁香假单胞菌MB03菌体，后将丁香假单胞菌MB03菌体用PBS缓冲液洗涤四遍之后，用PBS缓冲液悬浮成为用于杀灭线虫的菌体悬液。

3.根据权利要求1所述的丁香假单胞菌在杀灭线虫中的应用，其特征在于，丁香假单胞菌MB03菌体细胞破碎液的制备方法是：将丁香假单胞菌MB03菌体用PBS洗涤四遍之后所得的悬浮菌体再进行压力破碎后，再以12000r·min^-1，4℃离心15min，上清液即为细胞破碎液。

4.根据权利要求1所述的丁香假单胞菌在杀灭线虫中的应用，其特征在于，丁香假单胞菌MB03胞外粗蛋白的制备方法是：对丁香假单胞菌MB03菌体制备过程中的发酵上清液中的蛋白进行硫酸铵沉淀，再经过透析除盐，最后得到用于杀灭线虫的丁香假单胞菌MB03胞外粗蛋白，还用作实验生测所需的菌体样品；对发酵上清液中的蛋白进行硫酸铵沉淀时，向发酵上清液中投入硫酸铵的量为发酵上清液重量的0.05％～100％；向丁香假单胞菌MB03菌体制备过程中的发酵上清液中投入硫酸铵的量分为5级：第1级为0.05％～50％，第2级为50％～60％，第3级为60％～70％，第4级为70％～80％,第5级为80％～100％，分别得到5种不同的丁香假单胞菌MB03胞外粗蛋白。

5.根据权利要求1所述的丁香假单胞菌在杀灭线虫中的应用，其特征在于，丁香假单胞菌MB03胞内粗蛋白的制备方法是：对细胞破碎液中的蛋白进行硫酸铵沉淀，再经过透析除盐，最后得到用于杀灭线虫的丁香假单胞菌MB03胞内粗蛋白；对细胞破碎液中的蛋白进行硫酸铵沉淀时，向细胞破碎液中投入硫酸铵的量为细胞破碎液重量的0.05％～100％。

6.一种丁香假单胞菌作为线虫防治的资源和机制研究的应用，其特征在于，丁香假单胞菌分类命名为丁香假单胞菌MB03(Pseudomonas syringae MB03)，保藏日期为：2014年4月2日，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏中心保藏编号：CCTCC NO:M 2014114，形态及生理生化特征包括：在LB固体培养基上菌落突起，呈乳白色，菌体镜检呈杆状，为革兰氏阴性菌；以杀灭秀丽隐杆线虫和南方根结线虫的因子丁香假单胞菌MB03胞外粗蛋白和胞内粗蛋白用于分子基因操作。