[发明专利]一种生物样本的保存和分析前预处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物样本的保存和分析前预处理方法；属于药物领域。

背景技术

药物动力学研究(包含生物等效性和生物利用度研究)无论在临床前研究、临床研究还是在上市后临床应用研究中都十分重要，可以揭示药物在不同种属动物、不同人群中的经时变化规律。药物动力学研究中的生物样本是指在研究过程中采集的血样、尿样、粪样及其他体液和组织样本。这些样本需要在低温冷冻条件下保存，以确保在完成分析测试前及以后一段时间内的稳定性。有些样本甚至在-80℃的条件下仍不够稳定。这种方法不经需要昂贵的设备和大量的能量消耗，还无法保证样本的稳定性。这些冷冻保存的样本，在分析测试前，需要解冻后进行前处理。前处理的目的是除去生物样本中的蛋白质等生物杂质，保留待测物。目前的方法有蛋白沉淀法、液液萃取法、固相萃取法等。这些方法不或多或少存在纯化效率不高，操作复杂繁琐、无法制定标准操作的缺点。寻找一种既可以保证样本稳定性，又节能环保，既有利于提高后期前处理纯化效率，又有可以制定标准操作的样本处理方法具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能在温和条件下稳定保存生物样本和简化生物样本检测前预处理流程，提高前处理时生物样本的富集和纯化效率的方法。

本发明提供了一种生物样本的保存和分析前预处理方法，该方法是把定量的生物样本加入到样本管的样本室中，所述的样本管管内中部填充有一段由玻璃纤维、硅胶、键合硅胶或纤维素填充材料构成的填充段，所述填充段将样本管分隔成上部的样本室和下部的溶出液接收室；进行冷冻干燥使生物样本吸附在填充段的填充材料表面，再在样品管内充氮气或抽真空，进行密封保存；进行生物样本处理时，直接在样本室中加入含内标的有机溶剂，有机溶剂从样本室流经填充段对吸附在填充材料表面的生物样本进行溶出后，流入溶出液接收室，溶出液接收室所得的溶出液采取直接进样或者吹干后定容进样进行分析测试；所述的有机溶剂不溶解填充材料和生物样本中的生物杂质。

本发明的生物样本的保存和分析前预处理方法还包括以下优选技术方案：

优选的有机溶剂为甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿中的一种或几种。

所述的填充材料与生物样本的质量之比为1:0.2～1:3。

所述的冷冻干燥是在-50～-20℃下真空干燥。

所述的冷冻干燥时间为10～30h。

所述的有机溶剂的用量为0.2～3mL。

所述的分析测试所用的仪器为高效液相色谱仪、气相色谱仪或高效液相色谱质谱联用仪中的一种。

所述的生物样本为含药生物样本，如血样、尿样、生物组织或唾液中的一种。

所述的保存可以根据实际情况采用冷冻、冷藏或室温保存。

所述的有机溶剂流经填充段时可以采用超声辅助溶出。

所述的填充段中填充材料具有大量可供溶液自由通过的微孔，也可以通过离心加快溶液流经填充段的速率。

所述的生物样本加入到样本管的样本室中后可以采用超声分散处理，使生物样本更好地分散吸附在填充材料表面。

本发明的有益技术效果：本发明通过发明人的反复研究，最终确定一种不但能稳定保存生物样本，而且能通过简单操作、较短流程，提高生物样本分析前预处理时的富集和纯化效率的方法，特别是含药生物样本如血样、尿样、唾液或生物组织等的保存和快速分析前处理方法。本发明方法采用特殊的PE样品管(如附图1)填装玻璃纤维、硅胶、凝胶或纤维素等吸附剂，在结合本发明的冷冻干燥和密封保存处理，对生物样本进行隔绝空气和吸附水的双重保护；样本分析前处理时，利用生物样本中蛋白质等生物杂质不溶于所选择的有机溶剂的特点，直接加入含内标的有机溶剂，进行溶解提取，溶出液直接进样测定或者挥干定容后进样测定；并且在溶剂溶出过程中将血浆中蛋白等物质固定于载体上从而减少测试样本中杂质干扰，达到纯化的目的。综上所述，本发明方法可以使生物样本在干燥、隔绝氧气的条件下保存，大大提供稳定性，降低样本保存条件要求；该方法还可以大大简化样本处理的流程，使样本处理操作标准化，同时还可以提高富集纯化效率，提高方法灵敏度、精密度和准确性。

附图说明

【图1】是本发明中的样本管；1为样本室，2为填充材料，3为溶出液接收室。

具体实施方式

以下实施例是对本发明内容的进一步说明，而不是对本发明保护范围的限制。