[发明专利]一种超灵敏碱性磷酸酶检测的新方法

权利要求书

1.一种超灵敏碱性磷酸酶检测的新方法，其特征在于，待测样品中的碱性磷酸酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸，生成5-溴-4-氯-3-吲哚和无机磷酸盐，5-溴-4-氯-3-吲哚还原尼罗蓝A，降低尼罗蓝A的SERS强度，间接检测碱性磷酸酶。

2.根据权利要求1所述的一种超灵敏碱性磷酸酶检测的新方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)将含有碱性磷酸酶的待测样品用含MgCl₂和NaCl的pH9.5的tris-HCl缓冲溶液稀释1-10000倍得到溶液；

2)将5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸水溶液和尼罗蓝A分子水溶液加入步骤1)溶液中，再在37℃温育30分钟，所述5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸水溶液在溶液中的初始浓度为1×10^-3-1×10^-6mol/L，所述的尼罗蓝A分子水溶液在溶液中的初始浓度为1×10^-4-1×10^-9mol/L；

3)将SERS活性材料加入步骤2)得到的溶液中，5分钟后测定SERS信号。

3.根据权利要求2所述的一种超灵敏碱性磷酸酶检测的新方法，其特征在于，所述MgCl₂在tris-HCl缓冲溶液中的浓度为0.1-50mmol/L，所述NaCl在tris-HCl缓冲溶液中的浓度为10-1000mmol/L。

4.根据权利要求2所述的一种超灵敏碱性磷酸酶检测的新方法，其特征在于，所述tris-HCl缓冲溶液的浓度为1-1000mmol/L。

5.根据权利要求2所述的一种超灵敏碱性磷酸酶检测的新方法，其特征在于，所述SERS活性材料为金纳米粒子悬浮液、银纳米粒子悬浮液、金银复合的纳米粒子悬浮液、金银与无机或有机材料复合的纳米粒子悬浮液或集成在固相基底上形成的纳米材料中的一种。