[发明专利]鉴定烟草花叶病毒种属的方法及其专用条形码引物

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种鉴定烟草花叶病毒种属的方法及其专用条形码引物。

背景技术

烟草花叶病毒属(Tobamovirus)为芜菁黄花叶病毒目(Tymovirales)帚状病毒科(Virgaviridae)成员；根据国际病毒分类委员会(International Committeeon Taxonomy of Viruses,ICTV)于2012年发布的最新病毒分类第九次报告，该病毒属包含了曼陀罗轻斑驳病毒(Brugmansia mild mottle virus,BrMMV)、黄瓜果实斑驳花叶病毒(Cucumber fruit mottle mosaic virus,CFMMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、鸡蛋花花叶病毒(Frangipani mosaic virus,FrMV)、木槿潜伏皮尔斯堡病毒(Hibiscus latent Fort Pierce virus,HLFPV)、木槿潜伏新加坡病毒(Hibiscus latent Singapore virus,HLSV)、Kyuri绿斑驳花叶病毒(Kyuri green mottle mosaic virus,KGMMV)、老布达辣椒病毒(Obuda pepper virus,ObPV)、齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)、菜椒轻斑驳病毒(Paprika mild mottle virus,PaMMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)、地黄花叶病毒(Rehmannia mosaic virus,RheMV)、长叶车前草花叶病毒(Ribgrass mosaic virus,RMV)、萨蒙氏仙人掌病毒(Sammons's Opuntia virus,SOV)、堇兰花裂病毒(Streptocarpus flower break virus,SFBV)、菽麻花叶病毒(Sunn-hemp mosaic virus,SHMV)、烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、芜菁脉明病毒(Turnip vein-clearing virus,TVCV)块根落葵轻型斑驳病毒(Ullucus mild mottle virus,UMMV)、山葵斑驳病毒(Wasabi mottle virus,WMoV)、油菜花叶病毒(Youcai mosaic virus,YMoV)、小西葫芦绿斑驳花叶(Zucchini green mottle mosaic virus,ZGMMV)等25个确定病毒种以及苘麻黄花叶病毒(Abutilon yellow mosaic virus,AbYMV)、甜椒斑驳病毒(Bell pepper mottle virus,BPMoV)、仙人掌轻斑驳病毒(Cactus mild mottle virus,CMMoV)、黄瓜斑驳病毒(Cucumber mottle virus,CuMoV)、鸡蛋果花叶病毒(Maracuja mosaic virus,MarMV)及Tropical soda apple mosaic virus(TSAMV)等6个暂定种。同时，该属内新的病毒种类还有增加的趋势；而且该属病毒的寄主范围相当广泛，给农业生产带来重大损失；因此，加强对该属病毒的检测鉴定具有重要意义。国内外研究人员采用了多种方法如直接观测法、电镜法、生物学测定法、血清学检测和分子生物学检测法等对该属病毒的检测鉴定做了大量的研究。随着各地植物种质资源的引进交流和栽培条件的改变，对该属病毒的检测鉴定方法也提出了更高的要求。

生物条形码技术是近年来出现的一种新的生物物种检测鉴定技术，由加拿大Guelph大学的分类学家Paul Hebert在2003年首次提出，其在物种标准化鉴定方面的优势已备受关注。线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因作为动物的DNA条形码已广泛应用于物种鉴定中；在植物上已选定叶绿体rbcl和matK基因作为基本的DNA条形码；真菌学家正对真菌类群进行不同基因片段的筛选与评价，以ITS作为真菌的首选DNA条形码。条形码技术是分类学中辅助物种鉴定的新技术，它代表了生物分类学研究的一个新方向，为进出境检验检疫提供了一种简单而有效的方法。在植物病毒方面，尚未有开展生物条形码技术的研究。