[发明专利]亚铁血红素—二氧化锰复合物的制备及其用于检测人IgG的方法

说明书

技术领域

本发明涉及亚铁血红素—二氧化锰复合物的制备及其用于检测人IgG的方法，属于生物传感领域。

背景技术

近年来，新型生物传感技术的构建及应用发展迅速，在临床早期诊断、环境监测、食品检测等领域得到了广泛应用。而很多传感方法及其应用受仪器及相关技术专业人员的限制而无法在许多发展中国家普及，所以构建一种简单、经济且无需借助精密仪器设备的传感方法成为科研热门研究领域。基于颜色变化来实现检测的生物免疫传感方法，因其反应迅速、方便经济、操作简单等特点而受到众多科研工作者亲睐。

现有的定量检测人IgG的方法包括电化学检测法，荧光检测法、化学发光法等。但这些方法依赖于一定的仪器设备，而且不能同一时间检测多种样品，所耗时间较长。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种结构稳定、具有过氧化物酶活性的亚铁血红素—二氧化锰复合物的制备方法，该制备方法简单、成本低。

本发明的另一个目的是在于提供了一种基于亚铁血红素—二氧化锰复合物的检测人IgG的方法，该方法利用亚铁血红素—二氧化锰复合物催化双氧水氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)产生颜色变化，实现了人IgG检测，该方法相对传统的酶联免疫法相比，不需要使用酶作为抗体标记物，具有稳定性好、简单、灵敏度高、选择性好、价格低廉等优点，实现了人体内免疫球蛋白IgG的高通量检测。

本发明提供了一种亚铁血红素—二氧化锰复合物的制备方法，该制备方法是将亚铁血红素与磷酸盐缓冲溶液混合后，加入氨水促使亚铁血红素溶解，再在混合溶液中依次加入过量的MnAc₂溶液和过量的NaOH溶液，搅拌均匀，再离心处理后，除去未反应完的MnAc₂和NaOH，即得。

本发明的亚铁血红素—二氧化锰复合物的制备方法包括以下优选方案：

所述的离心处理是在8000～10000rpm的速率下离心15～25min。

所述的磷酸盐缓冲溶液pH为7.4。

所制得的亚铁血红素—二氧化锰复合物PBS缓冲溶液清洗2～3遍，于不大于4℃的环境下储存备用。

本发明还提供了一种基于亚铁血红素—二氧化锰复合物的检测人IgG的方法，该方法是在聚苯乙烯96孔板的各个孔的底表面先固定羊抗人IgG，并用牛血清白蛋白将所述各个孔的底表面封闭；再在所述牛血清白蛋白封闭过的各个孔的底表面分别组装不同摩尔量的人IgG后，进一步组装亚铁血红素—二氧化锰复合物修饰兔抗人IgG；组装完成后，在各个孔中加入等量的含H₂O₂和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的柠檬酸缓冲液进行反应，反应完成后，用酶标仪测定各个孔中3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的氧化产物在652nm的吸光度值，进行比色分析。

本发明的基于亚铁血红素—二氧化锰复合物的检测人IgG的方法还包括以下优选方案：

优选的方法是先在聚苯乙烯96孔板的各个孔中加入羊抗人IgG静置8～12h，除去多余的羊抗人IgG，再在所述的各个孔中加入牛血清白蛋白静置2～3h，除去多余的牛血清白蛋白；再在各个孔中分别加入等体积不同浓度的人IgG溶液，在37℃下温育0.8～1.2h，除去各孔中的剩余人IgG溶液，再在各个孔中加入亚铁血红素—二氧化锰复合物修饰兔抗人IgG，在37℃下温育1.2～1.7h，除去各孔中的剩余亚铁血红素—二氧化锰复合物修饰兔抗人IgG；最后在各个孔中加入等量的含H₂O₂和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的柠檬酸缓冲液进行反应10～20min后，用酶标仪测定各个孔中3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的氧化产物在652nm的吸光度值，进行比色分析。

所述的亚铁血红素—二氧化锰复合物修饰兔抗人IgG通过以下方法制备得到，将所述的亚铁血红素—二氧化锰复合物依次置于壳聚糖溶液、戊二醛溶液和 兔抗人IgG中反应、离心处理，即得。