[发明专利]一种检测硒离子的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，特别涉及一种检测硒离子的试剂盒及其检测方法。

背景技术

硒是“生命的火种”，在人体中含量虽少，但它对人体的生理机能的调控和维持人体最佳营养状态起到很大的作用。研究表明，硒在人体内具有防癌抗癌、清除体内自由基、抗氧化、防衰老作用；硒能增强人体免疫力，如果缺少硒，人体的免疫力会大大降低，感染各种疾病的危险明显增加；硒还可以有效降低放疗化疗对人体的危害。

硒是生物二重性元素，既是人体内必需微量元素，又是一种毒性元素，其二重性与生物体内硒的含量有关。硒的生物学和医学的发展迫切需要详细了解生物样品中硒的含量。因此，生物体中硒含量的测定具有重要的意义。

目前测定生物样品中硒离子的方法有多种，主要为化学法检测和酶法检测。化学法测定操作复杂，要求测定温度在70℃以上，临床上很难实现；采用酶法检测不需要加热，在常温下即可反应，但是现有的酶法测定的试剂反应复杂，成本较高，且检测灵敏度低。因此，研发一种检测方便、试剂简单、灵敏度高的检测硒离子的产品具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种检测硒离子的试剂盒，该试剂盒采用酶循环法检测，检测方便；此试剂盒只需两步反应，节省了原料和成本，适用于临床检测；本发明提供的试剂盒灵敏度高、准确性好，线性范围宽，使用范围广，优于以前的检测方法，是临床检测的技术性更新。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种检测硒离子的试剂盒，其试剂包括pH为7.0～7.4的缓冲液、谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、还原型辅酶Ⅱ和谷胱甘肽还原酶。

该试剂盒的反应原理如下：

本发明的试剂盒采用酶循环法检测，加入谷胱甘肽过氧化物酶、还原型辅酶Ⅱ、谷胱甘肽还原酶和底物谷胱甘肽即可重复反应，反应中消耗还原型辅酶Ⅱ生成辅酶Ⅱ，在生化分析仪405nm波长下可检测还原型辅酶Ⅱ，进而可计算还原型辅酶Ⅱ的减少速度，还原型辅酶Ⅱ的减少速度与谷胱甘肽过氧化物酶的活性有关，谷胱甘肽过氧化物酶的活性与样本中硒离子的浓度相关，因此，此方法可准确检测出样本中硒离子的浓度。

此试剂盒只需两步反应，反应简单，所需原料少，成本低，且在常温下即可完成反应，适用于临床检测。

本试剂盒采用具有生物活性的酶及一些盐，对检测后的医疗废物的处理直接按照医疗废弃物处理即可，不增加多余处理步骤。

作为优选，缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液或MPOS缓冲液。

作为优选，缓冲液为磷酸盐缓冲液。

作为优选，磷酸盐缓冲液中包含磷酸二氢钠或磷酸二氢钾中的任意一种或两者的混合物。

作为优选，缓冲液的浓度为30～200mmol/L。

作为优选，谷胱甘肽的浓度为0.1～2.0mmol/L。

作为优选，谷胱甘肽过氧化物酶的浓度为800～3000U/L。

试剂中加入了谷胱甘肽过氧化物酶，可以与血清中的谷胱甘肽过氧化物酶一起作用，增进了反应速度，试剂盒的加测灵敏度大大提升，同时提升了检测的准确性。

作为优选，还原型辅酶Ⅱ的浓度为0.1-0.3mmol/L。

作为优选，谷胱甘肽还原酶的浓度为800～2500U/L。

作为优选，试剂盒中试剂还包括过氧化氢酶。

作为优选，过氧化氢酶的浓度为2～10KU/L。

试剂中加入过氧化氢酶，可以有效的清除反应过程产物过氧化氢及血清中的过氧化氢对酶促反应的干扰，因此，加入过氧化氢酶的试剂盒抗干扰能力强，检测准确度高。

作为优选，试剂盒中试剂还包括表面活性剂。

作为优选，表面活性剂为曲拉通X-100。。

作为优选，表面活性剂的浓度为0.1～0.5ml/L。

在试剂中加入表面活性剂，可进一步加快试剂盒检测硒离子的过程的反应速度。

作为优选，试剂盒中试剂还包括防腐剂。

作为优选，防腐剂为硫柳汞钠盐。

作为优选，防腐剂的浓度为0.1～0.5g/L。

试剂盒中的试剂变质后会导致试验结果不准确，在试剂中添加防腐剂可以防止试剂的变质，从而保证了试剂盒性能的稳定。

作为优选，试剂盒中试剂为单试剂或双试剂。

作为优选，试剂为双试剂，包括R1试剂和R2试剂。

作为优选，R1试剂包括pH为7.0～7.4缓冲液、谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶和还原型辅酶Ⅱ。