[发明专利]通过发酵过量生产γ-谷氨酰半胱氨酸和该二肽的衍生物的微生物和方法

权利要求书

1.一种能够过量生产γ-谷氨酰半胱氨酸、双-γ-谷氨酰胱氨酸和γ-谷氨酰胱氨酸的原核微生物菌株，由母株制备，其中，相对于所述母株，所述菌株具有降低的细胞谷胱甘肽合成酶活性，并且具有细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性，相比于具有相似降低的细胞谷胱甘肽合成酶活性的菌株，所述菌株具有的所述细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性更大地提高。

2.根据权利要求1所述的微生物菌株，其中，根据本发明所述的菌株中所述谷胱甘肽合成酶活性降低以使所述活性最高是相应野生型菌株的谷胱甘肽合成酶活性的50％。

3.根据权利要求1或2所述的微生物菌株，其中，所述细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性高于具有相似降低的细胞谷胱甘肽合成酶活性的菌株至少约5倍。

4.根据权利要求1或2所述的微生物菌株，其中，所述母株是大肠杆菌(Escherichia coli)或菠萝泛菌(Pantoea ananatis)菌株的成员。

5.根据权利要求1或2所述的微生物菌株，其中，相对于相应母株，所述母株是具有γ-谷氨酰半胱氨酸生物合成途径以及提高的L-半胱氨酸生物合成能力的微生物菌株。

6.根据权利要求1或2所述的微生物菌株，其中，通过提高gshA基因或gshA同源基因的拷贝数或通过使用致使gshA表达增加的启动子，达到升高的所述γ-谷氨酰半胱氨合成酶活性。

7.根据权利要求1或2所述的微生物菌株，其中，通过在启动子控制下克隆至质粒载体来提高gshA或gshA同源基因的拷贝数。

8.根据权利要求1或2所述的微生物菌株，其中，GshA具有以下蛋白序列：在第494位的氨基酸丙氨酸已被置换为缬氨酸或亮氨酸(A494V或A494L)，或者在第495位的氨基酸丝氨酸已被置换为苏氨酸(S495T)。

9.根据权利要求1或2所述的微生物菌株，其中，所述gshA基因的天然起始密码子TTG已被ATG替换。

10.一种用于过量生产γ-谷氨酰半胱氨酸(γGC)以及该二肽的衍生物γ-谷氨酰胱氨酸和双-γ-谷氨酰胱氨酸的方法，其中，在发酵培养基中培养根据权利要求1至9中任一项所述的微生物菌株，从所述培养基中除去细胞，并从所述培养基中纯化所需产物。