[发明专利]一种检测肠道屏障功能的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种检测肠道屏障功能的试剂盒，更具体地说，涉及一种检测血液中D-乳酸、二胺氧化酶和细菌内毒素的试剂盒。

背景技术

肠道屏障功能障碍主要表现为肠黏膜屏障受损、肠微生态紊乱和肠道动力障碍。肠屏障功能障碍是各种原因引起的肠黏膜损伤、萎缩，肠通透性增加，肠菌群失调，从而导致细菌和(或)内毒素易位，并可诱发和(或)加重全身炎症反应和多器官功能障碍。肠屏障功能障碍对危重疾病的发生、发展、转归有重要影响。肠屏障功能障碍在危重病患者中较常见，但目前尚缺乏较为客观的临床诊断标准与统一的治疗方案。

肠粘膜屏障是指肠道能防止肠腔内的有害物质如细菌和毒素穿过肠粘膜进入体内其他组织器官和血液循环的结构和功能的总和。它包括：肠粘膜上皮、肠粘液、肠道菌群、分泌性免疫球蛋白、肠道相关淋巴组织(Gut-associated lymphoid tissue，GALT)、胆盐、激素和胃酸等。肠道粘膜时常受到各种刺激性物质和损伤性因素的攻击和侵蚀，但在正常情况下肠粘膜仍能有效地发挥分泌、吸收等生理功能，并保持其结构的完整性。但是，在严重烧伤、创伤、手术等应激状态下，上述肠粘膜屏障作用受到破坏，可出现肠粘膜水肿，肠绒毛高度降低，肠系膜血管收缩，血流减少，细胞凋亡加速，严重者甚至造成细菌和毒素移位发展成为肠源性败血症，并可导致多脏器功能衰竭(MOF)而危及生命。

通常可以通过检测肠道通透性、肠粘膜的损伤情况以及细菌是否易位等来检测肠道屏障功能是否发生障碍。在临床上，通常可用各种核素标记肠道不吸收的大分子物质(如DTPA或EDTA等)，通过检测尿中核素标记物的排泄量来确定肠道通透性是否增高；以非代谢性的低聚糖为探针的肠道通透性检测方法在临床最为常用，其中又以乳果糖/甘露醇双糖分子探针为代表和最常用，尿中两者比值增高表明肠道通透性增高，粘膜机构屏障功能受损。但是此种方法操作繁琐，同时需要病人服用相应的不易吸收的物质，而且需要相应的检测仪器，在临床上较难推广。细菌易位常用的诊断方法有细菌培养，通常是在无菌条件下取肠系膜淋巴结等进行细菌培养,培养到细菌即为阳性，但是此种方法有相当大的创伤性，难以在临床上开展。

目前，在临床上急需一种简便、快捷的方法来迅速对住院病人的肠道屏障功能是否发生障碍做出较为全面准确的判断。

发明内容

本发明的目的是提供一种肠道屏障功能的检测试剂盒。本试剂盒中的三项指标中D-乳酸代表肠道通透性的变化，二胺氧化酶代表肠黏膜的损伤程度，细菌内毒素代表肠道是否发生细菌易位。本试剂盒将三项指标综合在一起测定，分别从三个方面综合而且全面的反映了肠道的屏障功能。

为了实现本发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测肠道屏障功能的试剂盒，其包括：

1)反应装置

所述反应装置包括血浆分离器和反应基板，反应基板包含空白对照孔、二胺氧化酶反应孔、D-乳酸反应孔和细菌内毒素反应孔；

2)一种或多种显色液；

3)一种或多种稀释液。

前述试剂盒，所述的血浆分离器每个孔内设有血浆分离膜。

前述试剂盒，所述的空白对照孔内放有空白垫。

前述试剂盒，所述的二胺氧化酶反应孔从孔底部起依次放有底物垫和显色垫。

其中，所述底物垫由底物溶液滴加在载体上制备而成；所述的底物溶液以100-1000mmol/L pH6.0-8.0的缓冲液为溶剂，包括0.0001-0.01g/mL的二胺氧化酶底物、10-10000U/mL的过氧化物酶、0.005％-50％的稳定剂和0.005％-50％的表面活性剂；

其中，所述底物为腐胺、组胺、尸胺或者氨基丁烯，优选所述底物为腐胺和尸胺；

其中，所述100-1000mmol/L pH6.0-8.0的缓冲液为磷酸钠缓冲液、磷酸钾缓冲液、Tris-HCl缓冲液或PIPES缓冲液的一种或几种，优选所述缓冲液为600-800mmol/L pH6.5-7.0的磷酸钠和磷酸钾缓冲液；

其中，所述稳定剂为D-海藻糖、蔗糖、葡聚糖、β-环糊精、牛血清白蛋白、甘露醇、聚乙二醇、明胶、肌醇、木糖或阿拉伯糖醇中的一种或几种，优选所述稳定剂为D-海藻糖；

其中，所述表面活性剂为吐温80、吐温20、Triton X-100、NP40或山梨醇中的一种或多种，优选所述表面活性剂为吐温80。