[发明专利]一种热应激改变不同部位α受体介导的血管收缩功能促进肾血流的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种热应激改变不同部位α受体介导的血管收缩功能促进肾血流的检测方法。

背景技术

大鼠热应激(Heat stress，HS)指大鼠置于高温环境，使直肠温度升至42℃，持续15分钟。可以诱发机体产生多种内源性物质而起到心血管保护作用，即产生预适应效应，热应激能诱发早期预适应(early preconditioning，EPC)数分钟内出现，持续2-3小时，同时诱发延迟预适应(delayed preconditioning，DPC)，预适应后24小时重复保护，持续2-3天^[1,2]。热应激可以引起类似于缺血-再灌注的心血管保护效应^[3,4]。热应激预适应心脏保护作用表现为热应激后能耐受随后较长时间缺血损伤，减少严重缺血再灌注所引起的心肌梗塞范围，降低心率失常发生率，改善缺血时心肌细胞功能^[5,6]。组织器官的功能正常与否与局部血流供应有关，血管的舒缩状态是影响支配组织血流量的重要因素，交感神经系统是体内调节血管张力的重要系统。我们猜测热应激可以改变不同部位血管平滑肌α肾上腺素受体的反应性，从而产生保护重要器官的效应，但未见文献报道。本实验用高灵敏的小血管张力描记技术研究热应激延迟预适应对大鼠肾动脉、肠系膜动脉、股动脉平滑肌α受体介导收缩功能的影响，考察热应激后α受体的反应性，并使用RT-PCR的方法考察热应激对不同部位动脉α₁受体mRNA、α₂受体mRNA水平的影响。

发明内容

本发明的目的在于使用高灵敏的小血管张力描记技术，提供一种检测热应激延迟预适应对大鼠肾动脉、肠系膜动脉、股动脉平滑肌α受体介导收缩功能的影响的方法。

1材料与方法

1.1动物与试剂

成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，SPF级，体重250～300g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。PowerLab数据记录和分析系统，软件Chart5.0以及硬件8通道桥式放大器(ADInstruments Co，Australia)；FT03C张力换能器(Grass Instrument Co.Quincy，Mass.，U.S.A)；Myograph恒温浴漕(丹麦DMT)；红外线加热室(成都泰盟)；解剖显微镜，型号：SMZ168-TL，麦克奥迪实业集团有限公司。苯肾上腺素(phenylephrine，PE)，乙酰胆碱(acetylcholine，ACh)，5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)购于Sigma公司，浓度以浴槽中最终药物浓度表示。实验中使用分析纯化学试剂，双蒸水。

1.2热应激动物模型及动脉环的制备

大鼠腹腔内注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉，放入红外线加热的人造环境室(成都泰盟)，大鼠肛温计测量肛温，保持肛温42℃15分钟，即完成热应激大鼠模型^[7]。对照组同样麻醉，但是没有升温过程，自然苏醒。48小时后，实验大鼠二氧化碳麻醉，断头处死，迅速取出肾动脉、肠系膜动脉、股动脉浸入冷Krebs液(含mmol/L：NaCl119、NaHCO₃15、KCl4.6、MgCl₂1.2、NaH₂PO₄1.2、CaCl₂1.5和葡萄糖5.5)中，显微镜下剥离血管周围组织，0.1％Tritonx-100血管内灌注10秒，去除血管内皮，再用缓冲液冲洗10秒，当10μM乙酰胆碱引起的舒张率＜10％，认为内皮已被去除^[8]。将处理好的动脉切成1mm长的圆筒段。实验分组为热应激组、对照组，每组大鼠14只。

1.3血管张力记录