[发明专利]一种香樟成年态潜在试管开花材料的选择及植株再生方法

说明书

技术领域

本发明涉及林业技术领域，尤其涉及一种香樟成年态潜在试管开花材料的选择及植株再生方法。

背景技术

香樟是樟科樟属植物，本种枝叶繁茂，冠大荫浓，树姿雄伟，是城市绿化的优良树种，广泛用作庭荫树，行道树，防护林及风景林。又因其含有特殊的香气和挥发油，而耐湿、抗腐、祛虫、保存期长，是贵重家具、高级建筑、造船和雕刻等理想的用材，此外香樟的全身各组成部分都能提取重要的化工原料：樟脑、樟油，这是我国的一项重要的出口物资；因此，香樟与楠、梓、桐合称为江南四大名木。近年来，香樟在园林绿化中的应用越来越多，但是仍有一些方面有待改良：一棵成年香樟一年结实量可超过100,000粒(LandProtection,2001)，这些果实掉落在人行道上，或被鸟食用后随粪便到处污染路面或行人衣物，造成许多不便。因此，高结实能力限制了香樟在园林中的应用。在有些国家，樟树甚至因为其巨大的结实量和极强的繁殖能力而被限制种植，如澳大利亚曾颁布土地保护法限制人们在农田附近、郊区或城市中种植樟树(Land Protection,2001)，在佛罗里达，樟树被列为I级入侵物种而被禁止种植(FLEPPC,2001)。为了使香樟得到更广泛的应用，充分发挥它的观赏价值和经济价值，更好地为人类服务，培育无果或者结实量降低的香樟新种质就被提上了议事日程。

植物细胞工程和植物基因工程理论和技术的不断发展，为转基因技术培育无果香樟提供了理论依据和实现可能。生物技术改良香樟必须以高效植株再生体系的建立为研究基础，但目前由于多采用香樟胚性愈伤组织为转基因外植体材料，胚性愈伤组织对香樟这个物种而言再生频率较低；加之转化外源基因后，需要在选择配方中添加一定浓度的抗生素来筛选转化材料，而抗生素的添加又增加了诱导其再生植株难度，最终导致香樟难获转基因植株；此外，通过胚状体再生获得的植株具有和实生苗一样的幼年期(即木本植物只有经历过一段时间的营养生长阶段，才能进入开花结实阶段)，因而也不适合作为进行开花机理或者转基因抑制开花的研究材料；以上种种因素制约着生物技术改良香樟的进程。建立一套稳定、可人为调控的试管开花香樟组培体系是通过转基因手段抑制香樟开花从而降低结实量的研究基础；而成年态潜在试管开花材料的选择和离体培养是建立该组培体系的重要物质基础。

因此如何提供一种具有试管开花潜能成年材料选择方法和该材料的植株再生方法，对本领域的技术人员来说是亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种以成年态材料判定方法以及选择成年态材料为外植体的香樟植株再生方法。

本发明采取的技术方案是：

本发明的香樟成年态潜在试管开花材料的选择及植株再生方法的具体步骤如下：

(1)香樟成年态潜在试管开花材料的的判定：

成年香樟树龄8-10年，胸径约为13.5cm，立地条件良好，树体健壮无明显外部损伤的当年生具鳞芽茎段，其鳞芽于次年3月底-4月初，萌动发芽后，具花芽小枝占调查鳞芽比达95％以上，确定为香樟成年态潜在试管开花材料；

(2)香樟外植体的选择：

于12月底至次年1月间，从步骤(1)确定的香樟成年态潜在试管开花材料中选取成年健康香樟的当年生具鳞芽枝条作为外植体来源；

(3)香樟外植体的处理：

从步骤(2)选择的外植体来源中采集直径在2-3mm的香樟当年生枝条，枝条上每节均有鳞芽；去除鳞芽、叶片和叶柄，自来水下流水冲洗30min；将仅有叶痕留存的枝条，用手术剪按照一个外植体上一个叶痕的方式处理香樟枝条，获得长度在1.5-2cm的香樟具节茎段；

(4)香樟植株再生：

将步骤(3)处理后的香樟具节茎段进行消毒处理，然后接种于萌发培养基诱导其萌发，光照培养；

将来诱导出丛枝数多的成年态材料切割分离转入萌发培养基进行继代，扩大繁殖建立高增殖系数的茎段培养苗无性系，作为稳定的成年态茎切段供应来源，即成年态茎段培养苗扩繁体系；

以成年态茎段培养苗茎切段为外植体，转入诱导培养基诱导其不定芽形成，建立茎段培养苗茎切段再生体系，光照培养；茎切段再生不定芽转入MS培养基进行壮苗生长。

步骤(4)中，萌发培养基的配方为：MS+BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂粉，萌发培养基的pH＝6.0。诱导培养基的配方为：MS+BA3.0mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂粉，诱导培养基的pH＝6.0。

本发明的积极效果如下：