[发明专利]一种毛蚶多糖的鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品检测方法，具体涉及一种毛蚶多糖的鉴别方法，属药品技术领域。

背景技术

毛蚶肉含丰富的蛋白质、维生素及人体所必需的氨基酸，自古就有着食用、药用价值，《医林纂要》注“蚶肉补心血、散瘀血、除烦醒酒、破结消痰”，《日华子本草》注“蚶肉益血色”。近年来，研究报道显示毛蚶有抗肿瘤作用，具有清除体内自由基、提高机体免疫力的功效。毛蚶肉制剂对肺癌、肾癌、胃癌、肝癌等多种癌症具有较好的治疗作用，且安全性良好。

根据文献报道毛蚶多糖是毛蚶的主要生物活性成分之一，具有抗肿瘤、调节免疫的功效。现有文献动植物多糖的含量测定方法较多，但对动植物多糖的专属性报道很少，更未见对毛蚶多糖专属性鉴别方法的研究报道。 无法在生产和使用中有效的保证产品质量，进而药品疗效得不到保证。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种毛蚶多糖的专属性鉴别方法，使毛蚶制剂在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品疗效。

本发明是这样实现的：

一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于使用凝胶色谱柱高效液相色谱法，具体步骤如下：

色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05-0.15mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：30℃-45℃；流速：0.5ml-1 ml /min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于3000；

制备毛蚶多糖：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约0.5-5g的样品，加10-20倍的石油醚：乙醇=1：0.5-2的溶液，于30℃-50℃水浴保温1-3hr，超声提取15-45min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水10-30ml，用氢氧化钠溶液调pH至6.5～8.5，70℃-90℃水浴0.5-4hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水5-50ml，继续水浴搅拌0.5-2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加1-4倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水5-50ml，70℃-90℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入2-5倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。

制备毛蚶多糖供试品溶液：取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含2-25mg的溶液，即得。

测定：取毛蚶多糖供试品溶液10-100μl，注入液相色谱仪，测定;

多糖图毛蚶谱中呈现2个特征峰，以图谱中的S峰为参照，计算2特征峰与S峰的相对保留时间：峰1为0.56±10%、峰2为0.68±10%、峰S 为1。

上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，优化为色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.1mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：40℃；流速：0.5ml /min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于5000；

上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，制备毛蚶多糖优化为：

取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约1-3g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1-1.5的溶液，于35℃-45℃水浴保温2-3hr，超声提取20-40min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水15-25ml，用氢氧化钠溶液调pH至7～8，80℃水浴1-3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水10-40ml，继续水浴1-2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加2-3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水15-25ml ，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3-4倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。