[发明专利]抗VEGFR2人源纳米抗体NTV1及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种抗VEGFR2人源纳米抗体，包括框架区和互补决定区，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本发明还提供一种制备抗VEGFR2纳米抗体药物的制备方法，包括以下步骤：a.采用噬菌体展示技术筛选与VEGFR2结合的纳米抗体；b.纳米抗体的表达纯化；c.采用AlphaScreen技术测定抗原和抗体间的相互作用，进一步筛选出的亲和力最高的抗体。本发明得到具有更高亲和力和良好抗肿瘤活性的人源纳米抗体NTV1。本发明表达并优化获得亲和力高且稳定均一的VEGFR2纳米抗体蛋白，成功研发人源抗VEGFR2纳米抗体药物，开辟了靶向VEGFR2抗体的药物研发的新领域。

技术领域

本发明涉及生物制药领域。更具体地，本发明涉及一种VEGFR2纳米抗体、该抗体的制备方法以及该抗体在制备抗癌症药物中的用途。

背景技术

恶性肿瘤是当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一，截止2012年，全世界有超过820万人死于癌症，世界卫生组织和各国政府卫生部门都把攻克癌症列为一项首要任务。但是肿瘤的治疗仍然是当今医学界的难题，研究人员一直在寻找肿瘤治疗的新方向。通过研究肿瘤发现，血管生成是肿瘤发生、发展的必要条件，而血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)作为血管生成关键因子VEGF的受体也成为抗肿瘤药物的靶向的研究热点。

肿瘤血管为肿瘤的生长提供了充足的营养供给，同时也促进了癌细胞的扩散和转移。VEGF是主要作用于血管内皮细胞的生长因子，具有促进内皮细胞增殖、增加微血管通透性、诱导血管生成等多种功能。已有研究证实VEGF的高表达与实体肿瘤的形成及其转移、风湿性关节炎、牛皮癣、糖尿病性视网膜病变、动脉硬化等疾病有着密切关系。VEGF通过与血管内皮细胞膜上的特异性受体VEGFR结合来激活信号传导。VEGFR家族的成员包括：VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3。它们均为跨膜蛋白，由胞外的7个免疫球蛋白样的功能域、胞内的酪氨酸激酶功能域和中间的一段跨膜序列组成。其中VEGFR2定位于人4q11-12，由1356个氨基酸构成，可促进血管内皮细胞增殖、迁移及增加毛细血管通透性。研究已经证实，肿瘤血管内皮细胞的有丝分裂与肿瘤微血管的渗透性主要是通过VEGF与VEGFR2的相互作用而发生的。VEGFR2在健康的成人身体内表达水平很低甚至不表达；而在许多肿瘤中，例如乳腺癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌、肝细胞癌、成血管细胞瘤、脑胶质瘤等的肿瘤血管内皮细胞中是高表达的。另外，VEGFR2胞外区部分缺失实验证实：VEGF主要是通过与VEGFR2胞外的I-III区特异性结合来发生信号传导的。