[发明专利]一种微量多肽化学衍生体系及衍生方法

权利要求书

1.一种微量多肽化学衍生体系，该体系由置于Eppendorf枪头中的、由上至下的三层填料层组成；其中，最上层的填料为反相硅胶，中间层的填料为磺酸基阳离子交换键合硅胶，最下层的填料为反相硅胶。

2.根据权利要求1所述的化学衍生体系，其特征在于，各填料层的厚度为3～5mm。

3.根据权利要求1所述的化学衍生体系，其特征在于，各填料的粒径为3～10μm。

4.根据权利要求1所述的化学衍生体系，其特征在于，所述反相硅胶选用C₈或C₁₈，优选为C₈。

5.根据权利要求1所述的化学衍生体系，其特征在于，所述Eppendorf枪头为实验室常用Eppendorf枪头，规格为200μl。

6.权利要求1所述微量多肽化学衍生体系的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将一片直径为1～2mm的特氟龙薄膜水平放置到Eppendorf枪头底部；

2)将反相硅胶悬浊液缓慢加入特氟龙薄膜之上，进行离心，最下层即得；

3)将磺酸基阳离子交换键合硅胶悬浊液缓慢加入步骤2)所得最下层之上，进行离心，中间层即得；

4)将反相硅胶悬浊液缓慢加入步骤3)所得中间层之上，进行离心，微量多肽化学衍生体系即得；

其中，各离心步骤的离心机转速为1000×g，离心时间为5min。

7.一种应用权利要求1所述微量多肽化学衍生体系进行多肽正电荷衍生的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)衍生体系的平衡；2)样品与正电荷衍生试剂的载入；3)正电荷衍生反应；4)副产物的洗脱；5)衍生多肽的脱盐；6)衍生多肽的洗脱。

8.根据权利要求7所述的多肽正电荷衍生方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)使用45％乙腈100μL进行系统的清洗，使用0.1％三氟乙酸溶液100μL进行系统的平衡；

2)将多肽样品与TMPP-Ac-OSu衍生试剂以质量比1:2溶解于含5％乙腈与0.1％三氟乙酸的溶液100μL，载入微量反应体系最上层；

3)载入pH8.2、浓度为20mmol/L的碳酸氢钠缓冲液100μL，引发衍生反应；室温下孵育2小时后，使用0.1％三氟乙酸溶液100μL进行清洗，终止衍生反应；

4)使用pH3.0、含有5mmol/L磷酸二氢钾和45％乙腈的缓冲液A100μL进行洗脱，将衍生多肽产物从最上层洗脱下来并结合到中间层，同时将以TMPP-Ac-OH为主的衍生反应副产物除去；使用pH3.0、含有5mmol/L磷酸二氢钾、500mmol/L氯化钾和45％乙腈的缓冲液B100μL进行洗脱，将衍生多肽产物从中间层洗脱下来并结合到最下层；

5)使用0.1％三氟乙酸溶液100μL进行洗脱，去除衍生反应中的盐杂质；

6)使用45％乙腈100μL进行洗脱，衍生多肽样品即得。

9.权利要求1所述微量多肽化学衍生体系在多肽从头测序中的应用，其特征在于，将由所述体系进行化学衍生得到的衍生多肽用于质谱分析。