[发明专利]一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质精制技术领域，具体涉及一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法。

背景技术

鱼精蛋白是从鱼类精子细胞中提取的一种多聚阳离子肽的硫酸盐，在临床上，是唯一可以用来拮抗心脏手术中肝素过量的药物，同时硫酸鱼精蛋白还可以用于配制长效胰岛素和长效促皮质素。因为硫酸鱼精蛋白具有抗菌作用，在食品行业，硫酸鱼精蛋白也可用于制作食品防腐剂。

生产硫酸鱼精蛋白主要采用提取、分离及精制三个步骤。通常，经过提取和分离，能从鱼白中得到鱼精蛋白粗提物。但是不论采取何种提取方法，最后得到的鱼精蛋白粗提物都需要经过最后的精制步骤。

鱼精蛋白的提取一般是将成熟鱼类的鱼白绞碎，加入稀醋酸溶液，分离出凝聚的精子核，然后采用有机溶剂沉淀，之后加入无机酸搅拌一定时间，弃去废渣，提取液采用有机溶剂沉淀，得到鱼精蛋白无机酸盐粗品。在分离步骤，最常用的方法就是有机溶剂和硫酸反复沉淀溶解，逐步去除不同的杂质。也有采用蛋白沉淀剂如钨酸，偏磷酸，磺基水杨酸等进行沉淀分离的。

现有技术最常用的蛋白质精制方法是采用色谱柱进行纯化，结合鱼精蛋白本身的特性，纯化鱼精蛋白，主要是采用离子交换层析和肝素亲和层析。但是，不管是离子交换层析还是肝素亲和层析，需要投入的成本都很大，且单次纯化量有限，操作要求高，不适合大规模生产。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于为了克服现有技术中采用离子交换层析法、或肝素亲和层析法纯化硫酸鱼精蛋白所存在的成本高、单次纯化量有限、操作要求高、不适合工业化生产的缺陷，提供一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法。本发明采用吸附剂直接吸附纯化硫酸鱼精蛋白的精制方法，不仅操作简单，而且成本远低于色谱法，生产规模也远高于色谱法，产品纯度与色谱法得到的产品纯度相当，很适合进行工业化生产。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法，其包括下述步骤：

(1)将硫酸鱼精蛋白粗提物溶解于水中得溶液，加入酸，调节溶液pH值为1～2；

(2)加入吸附剂，搅拌，过滤，得到滤液；

(3)加入碱，调节滤液pH值为10～12，再加入吸附剂，搅拌，过滤；

(4)加入有机溶剂，离心除去上清液，将沉淀物真空干燥，即得；

其中，步骤(2)与步骤(3)中所述的吸附剂为硅藻土、活性矾土、皂土、骨炭、活性炭和硅胶中的一种或多种。

其中，所述的硫酸鱼精蛋白粗提物可为本领域的常规硫酸鱼精蛋白粗提物，本发明优选购于上海第一生化药业有限公司的硫酸鱼精蛋白粗提物。优选所述的硫酸鱼精蛋白粗提物通过下述方法制得：将鱼白与纯化水的混合物匀浆后，加入醋酸调节pH为3.5～4.5，沉淀物用硫酸溶解，离心后上清液用无水乙醇沉淀，沉淀物溶于纯化水，0～4℃静置，下层油状物溶于纯化水中，硫酸调节pH为1.5～2.5，加入无水乙醇沉淀，沉淀物干燥，即得硫酸鱼精蛋白粗提物。

步骤(1)中，所述的水较佳地为纯化水；所述的硫酸鱼精蛋白粗提物与所述的水的质量比较佳地为1：(10～30)。

步骤(1)中，所述的酸较佳地为硫酸。

步骤(2)中，所述的吸附剂与所述的溶液的质量比较佳地为5：(1000～100)。

步骤(2)中，所述的搅拌较佳地为在水浴条件下搅拌，所述的水浴的温度较佳地为30～50℃。所述的搅拌的时间较佳地为1～3小时。

步骤(3)中，所述的碱较佳地为氢氧化钠和/或氢氧化钾。

步骤(3)中，所述的吸附剂与所述的溶液的质量比较佳地为5：(1000～100)。

步骤(3)中，所述的搅拌较佳地为在水浴条件下搅拌，所述的水浴的温度较佳地为60～85℃。所述的搅拌的时间较佳地为1～3小时。

其中，所述的有机溶剂可为本领域常规使用的各种有机溶剂，更佳地为乙醇、乙醚、丙酮和甲醇中的一种或多种，最佳地为0～4℃放置过夜的无水乙醇。所述的有机溶剂与所述的溶液的质量比较佳地为(1.0～3.5)：1。

其中，所述的离心的转速较佳地为3000～5000rpm，所述的离心的时间较佳地为10～20min。

其中，所述的真空干燥的真空度较佳地为0.08～0.1MPa，所述的真空干燥的时间较佳地为24～30小时。

其中，所述的真空干燥较佳地在放入五氧化二磷的真空干燥箱中进行。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。