[发明专利]一种小肽、其合成方法及其增强家畜免疫力的用途

说明书

发明领域

本发明涉及一种增强免疫力活性小肽，具体地说是涉及增强免疫力活性小肽及其制备方法。

背景技术

肽是氨基酸的线性聚合物，含氨基酸残基50个以上的通常称为蛋白质，低于50个氨基酸残基的称为肽。小肽也称寡肽，一般是指由2-10个氨基酸组成。现已证实小肽能完整地被吸收进入血液循环，在机体发挥着重要的生物学功效。动物为了达到最佳免疫性能和生产性能，必须需要一定数量的小肽。近年来，随着现代生物技术特别是现代微生物发酵技术的发展，目前市场上已有许多通过水解动植物蛋白、微生物发酵等工艺生产的蛋白质-肽-氨基酸混合制品,逐渐广泛的还被用于医药、保健品和化妆品等行业，还作为一种新型的饲料原料或添加剂用于畜牧业生产。

目前市场上可见到的增强免疫力活性小肽是大多由动物的小肠和肠粘膜加工而成的肽蛋白或是含有一定量的小肽的肽蛋白饲料或饲料添加剂，虽然也能提高动物的免疫力和生产性能，降低腹泻率和增强动物抗病力，但是大都存在以下缺陷：(1)产品的添加量较大0.1～1.5％；(2)产品功能不明确，功效不明显；(3)肽的分子量较大，一般为6000左右，仍然具有抗原性，对动物不利，易引起动物过敏反应；(4)制备成本高或产品成本高，不适于动物养殖使用。

目前市场上制备增强免疫力活性小肽的方法主要是酶解法，一般分为直接酶解法和微生物发酵法。直接酶解法使用高价格的酶，如使用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等植物蛋白酶，或是使用胰蛋白酶、胃蛋白酶等动物蛋白酶，但容易产生令人难以接受的腥味或苦味，且生产成本高，因而限制了其在相关行业中的应用；微生物发酵法虽然具有原料来源广泛、反应条件温和、生产成本低、环保等优点，但该法对于肽的提取难度大，产率低、成本高，对于其对机体的作用机制也难以阐述；第二是DNA重组技术法，该法由于小分子基因片段操作、表达与检测均存在着不少困难，且不易筛选到高效表达的菌株以及菌株的产量较低，同时因许多消费者反对使用由遗传改性生物所生产的食物产品，并担心有生物安全性和生物污染，而受到限制。

发明内容

本发明的目的在于为了克服现有技术的不足，提供一种增强免疫力活性小肽，用量低、但免疫功能明确，能显著提高动物(家畜)对营养素(如蛋白质、矿物质、维生素等)的吸收利用率、提高奶、肉、蛋的产量和生产能力，改善肉、蛋、奶的品质和风味，刺激动物免疫器官发育、提高抗病力、减少发病率，并能明显改善水产动物养殖水质，提高水产动物生长速度和存活率，广泛用于禽、牛、羊、猪、水产和经济动物，可作为抗生素的替代品。

本发明的另一目的在于提供生物活性小肽的合成方法，所得增强免疫力活性小肽为纯品。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

小肽的合成方法，包括GE-C增强免疫力活性肽的合成和纯化，其中GE-C增强免疫力活性肽合成路线如下：

试剂说明：(a)DIEA,DCC,HOBt；(b)TFA,CH₂Cl₂；(c)1NNaOH,CH₃OH.

以上合成路线的具体说明如下：

在冰浴条件下，以DIEA为缚酸剂，DCC与HOBt为混合缩合剂，二氯甲烷为溶剂,异亮氨酸酸甲酯盐酸盐(化合物2)与Boc-脯氨酸(化合物1)反应得到Boc-Pro-Ile-OMe(化合物3)，然后同样在冰浴条件下下将所得的Boc-Pro-Ile-OMe与三氟醋酸反应，得到Pro-Ile-OMe三氟醋酸盐(化合物4)。

按照合成化合物3的反应条件，以亮氨酸甲酯盐酸盐(化合物6)与Boc-丝氨酸(化合物5)反应得到纯Boc-Ser-Leu-OMe(化合物7)，然后同样在冰浴条件下下将所得的Boc-Ser-Leu-OMe与三氟醋酸反应，得到Ser-Leu-OMe三氟醋酸盐(化合物8)。

同样，按照合成化合物3的反应条件，以Boc-Tyr-OH(化合物9)和Pro-Ile-OMe盐酸盐(化合物4)为原料，合成得到Boc-Tyr-Pro-Ile-OH(化合物11)。

以化合物8和化合物11为原料合成Boc-Tyr-Pro-Ile-Ser-Leu-OMe(化合物12)，然后用NaOH将其水解，最后用三氟醋酸(TFA)处理脱去Boc保护基，得到Tyr-Pro-Ile-Ser-Leu-OH(化合物13)。

以下将具体说明所获得的增强免疫力活性小肽的用途

该增强免疫力活性肽的使用方法为：直接口服或加入水中饮用和肌肉注射。

(1)对鸡外周血PBMC细胞增殖活力的影响