[发明专利]肺炎链球菌溶血素突变体及其作为粘膜免疫佐剂的应用

权利要求书

1.一种肺炎链球菌溶血素突变体，其特征在于所述的突变体的基因包括核苷酸序列为SEQ ID NO.2的ΔPly。

2.上述的肺炎链球菌溶血素突变体作为粘膜免疫佐剂的应用。

3.ΔPly和DnaJ的融合蛋白，所述的融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6。

4.权利要求3所述的ΔPly和DnaJ的融合蛋白的基因，其特征在于所述的基因核苷酸序列为SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4。

5.含有SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4序列的质粒载体。

6.权利要求5所述的质粒载体在制备融合蛋白中的应用，所述的融合蛋白的分子量为93KDa。

7.一种肺炎链球菌感染预防用的融合蛋白质疫苗的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)用引物修饰法分别从S.pn基因组中扩增DnaJ及Ply基因片段；

(2)用引物修饰法获得Ply第146位氨基酸缺失的突变体基因；

(3)分别构建含有ΔPly、DnaJ、DnaJ-ΔPly及ΔPly-DnaJ基因的pET28a(+)重组质粒；

(4)将重组质粒分别转化到BL21(DE3)工程菌中，IPTG诱导可高效表达ΔPly、DnaJ、DnaJ-ΔPly及ΔPly-DnaJ蛋白，获得表达目的蛋白的工程菌BL21-pET28a(+)-ΔPly、BL21-pET28a(+)-DnaJ、BL21-pET28a(+)-DnaJ-ΔPly和BL21-pET28a(+)-ΔPly-DnaJ；

(5)分离纯化ΔPly、DnaJ、DnaJ-ΔPly及ΔPly-DnaJ目的蛋白；

(6)将ΔPly及DnaJ两种蛋白抗原按融合蛋白中的分子比例制成特定的蛋白混合物。