[发明专利]一种制备艾塞那肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽类药物的制备方法，是一种合成的具有胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂的II型糖尿病的治疗特效药-艾塞那肽的制备方法。

背景技术

艾塞那肽，英文名：Exenatide，为一直链39肽，结构式如下：

肽序列为：

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂

艾塞那肽是由Amylin公司开发的一支拟肠降血糖素，主要用于治疗II型糖尿病，于2005年4月28号获得美国FDA的批准。艾塞那肽具有GLP-1受体激动剂作用，在分子结构、生物活性、作用靶点及免疫原性等方面与GLP-1相似。艾塞那肽的分子结构与GLP-1 的同源性达53 ％，结构差异表现在：（1）C端多出9个氨基酸（PSSGAPPPS），不易被肽链内切酶降解；（2）N端第二个氨基酸为甘氨酸，不会被二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）分解。特殊的分子结构使本品在血浆中的半衰期长达9.57小时，患者每天注射两次且低血糖发生风险小，当血糖升高时，本品能够升高细胞内cAMP，诱导胰岛素释放；当血糖降低时，其诱导胰岛素释放的作用即会消退。此外，本品还能够以血糖依赖性方式降低胰高血糖素的分泌，并延迟胃排空。现有技术US6902744、US6924264中，艾塞那肽的制备采用固相合成的方法。此种方法由于艾塞那肽是含有39个氨基酸的长肽，存在技术难度大、合成周期长、生产成本高、过程中间体因为不能纯化带来的杂质致使产物纯度不高，不利于大规模生产等问题。

CN102942625A专利中报道了通过液相法先将Ser、Thr、Cys衍生化成伪脯氨酸结构，即侧链-羟基或β-巯基与醛或者酮形成类似脯氨酸的噁唑烷五元环结构，然后按照Fmoc固相合成、HPLC纯化后得到艾塞那肽，纯度为95 %、收率为36 %。这种方法由于先要液相生成相应的假二肽，因此存在合成周期长、生产成本高、不利于大规模生产等问题。

现有艾塞那肽的固相合成，由于艾塞那肽合成步骤较多，造成产物杂质种类比较多，包括： des-Glu¹⁵,Glu¹⁶-艾塞那肽及其它杂质等。其中有关杂质des-Glu¹⁵,Glu¹⁶-艾塞那肽的氨基酸序列如下：

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂

该杂质为毒性最大的杂质之一，而且极其不稳定，该杂质的存在严重影响艾塞那肽含量以及使用安全。因此需要找到有效的方法将其去除并使其达到优质标准级别0.1 %以下。本发明人研究发现，该杂质用现有技术的手段很难除去，有些方法虽可以去除部分，但去除效果不理想，难以达到优质标准级别同时容易造成艾塞那肽本身收率降低。

本发明人用现有的合成方法，制备艾塞那肽，发现成本高，收率低，杂质多，不适于工业化规模生产。为此，本发明人对艾塞那肽的制备方法进行了研究，提供了一种成本低、纯度高，适合规模化生产的艾塞那肽的制备工艺，此工艺既能有效控制des-Glu¹⁵,Glu¹⁶-艾塞那肽含量又不影响艾塞那肽的收率问题。

发明内容

本发明涉及一种制备艾塞那肽的方法，解决了现有技术存在的成本高，收率低，杂质des-Glu¹⁵,Glu¹⁶-艾塞那肽含量较大，不适合规模化生产的问题。本发明的目的在于提供一种成本低、纯度高，适合规模化生产的艾塞那肽的制备工艺，此工艺既能有效控制des-Glu¹⁵,Glu¹⁶-艾塞那肽含量又不影响艾塞那肽的收率问题。