[发明专利]B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法

权利要求书

1.一种B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，包括带盒盖的盒体(6)，盒体(6)内设有检测试纸，所述的检测试纸包括底板(1)，其特征在于，底板(1)上依次衔接有样品垫(2)、抗B族链球菌抗体量子点标记垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5)，所述的包被膜(4)上设有一条B族链球菌抗体检测区T线和一条羊抗兔多克隆抗体质控区C线，两条线平行排列。

2.根据权利要求1所述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，其特征在于，所述的盒体(6)的盒盖(61)上设有加样孔(71)和结果观察窗口(72)。

3.根据权利要求1所述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，其特征在于，所述的包被膜(4)两端分别与吸水垫(5)和抗B族链球菌抗体量子点标记垫(3)相互交叠连接，在抗B族链球菌抗体量子点标记垫(3)上压贴有样品垫(2)。

4.根据权利要求1所述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，其特征在于，所述的样品垫(2)为玻璃纤维样品垫。

5.根据权利要求1所述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，其特征在于，所述的包被膜(4)为硝酸纤维素膜。

6.根据权利要求1所述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，其特征在于，所述的抗B族链球菌抗体量子点标记垫为包被量子点标记B族链球菌抗体聚酯纤维素膜。

7.制备权利要求1所述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡，其特征在于，依次包括下述步骤：在底板(1)上依次衔接有样品垫(2)、抗B族链球菌量子点标记垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5)：

其中：

1)样品垫的制备方法是：将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时。

样品垫的缓冲液配方如下：2％BSA、1％PVP、0.5％Tween溶解于0.01的PBS(pH7.4)缓冲液中。

2)抗B族链球菌抗体量子点标记垫的制备方法是：

①用10mM pH8.4的硼酸缓冲液(2.5mM硼砂：10mM硼酸＝4.5:5.5(V:V))将水溶性羧基量子点8μM的QD525稀释至1μM；加入30μL10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液，室温反应1～2小时。用30kDa的超滤管超滤，除去未反应的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸，吸取超滤管内剩余液体，加上述缓冲液恢复为原体积。

②将抗B族链球菌抗体加入100kDa的超滤管中，用0.05M的pH8.4的硼酸缓冲液将抗体浓度调整为4mg/mL。

③按200μg/1mL的量，将步骤②制备的抗体加入到步骤①量子点溶液中，室温反应1～2小时；

④按10μL/1mL的量，向步骤③中加入甘氨酸，封闭未偶联抗体的活化羧基位点，反应30～60min；

⑤将偶联抗体的量子点溶液加入到30kDa的超滤管中，加入pH9.0浓度0.05M Tris-HCl溶液置换溶液缓冲体系。重复3～5次，恢复终体积为100μL。

⑥将步骤⑤中的在溶液4℃1800g离心取上清液；

⑦在步骤⑥所得的上清液中加入100μL抗体保存液，所述的保存液为含1wt％BSA，20wt％蔗糖，10wt％海藻糖，0.1wt％吐温-20和0.1wt％聚乙烯吡咯烷酮的0.05M Tris-HCl缓冲液。

⑧将上述所得的溶液用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为1～5μL/cm(优选2μL/cm)，放入37℃烘箱，干燥2～5小时。

3)包被膜的制备方法是：

①包被

检测线(T线)：在硝酸纤维膜上划线，在膜的一端用记号笔做好C线和T线的标记，C线和T线的距离为0.5cm，T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为1cm，用0.01M的PBS(pH7.4)将B族链球菌抗体稀释到1.2mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

质控线(C线)：用0.01M的PBS(pH7.4)将羊抗兔多克隆抗体稀释到1.5mg/mL进行包被，划线浓度为1μL/cm，速度100mm/s。

②干燥

放入37℃烘箱，干燥2～5小时。

8.根据权利要求7所述的B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于，步骤①所述的量子点缓冲液为0.05M的pH8.4的硼酸缓冲液。