[发明专利]一种单克隆微囊藻DNA的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于生物体的DNA提取技术,特别涉及一种单克隆微囊藻DNA的提取方法。 

背景技术

为了监测和预防微囊藻水华，提取DNA进行种属及毒性鉴定已经成为必要。目前微囊藻DNA提取技术，多是针对扩培后的藻株或野外混合水样直接提取，有三方面不足：一，时间长。由于要对单克隆微囊藻扩培，才能获得足够多的遗传信息一致的DNA用于分析，所以从采样到得到DNA耗时至少一周；二，受污染风险大。扩培操作繁琐，中间环节易受细菌污染，直接导致DNA不能用于分析；三，难以精准分析。野外混合水样直接提取DNA法，只能监测有无目的产毒微囊藻，不能测序，不能明确分类鉴定，无法深入分析研究。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种单克隆微囊藻DNA的提取方法。可以无污染风险地获得单克隆微囊藻DNA，精准分析目的微囊藻基因，PCR扩增片段可以直接测序，结果可用于种的鉴定、毒性鉴定，水体监测以及进一步的分子研究。 

本发明的技术方案是： 

一种单克隆微囊藻DNA的提取方法，其特征在于：将新鲜水样中微囊藻单克隆在解剖镜下分离(体积约1ul)，放入0.2mlEP管中，封口膜封严，置-86℃中30秒后，立即转入80℃水浴5分钟，反复5次；EP管中的1ul液体得到单克隆微囊藻DNA；直接作为DNA模板用于PCR反应。 

本发明效果是： 

本方法可以无污染风险地获得单克隆微囊藻DNA，精准分析目的微囊藻基因，PCR扩增片段可以直接测序。结果可用于种的鉴定、毒性鉴定，水体 监测以及进一步的分子研究。 

特点优点时间短(30-40分钟),无污染风险，可精确分析单克隆DNA(PCR结果可直接用于测序分析)，设备要求简单，不需任何化学试剂，易于掌握，易于推广。 

具体实施方式

一种单克隆微囊藻DNA的提取方法将新鲜水样中微囊藻单克隆在解剖镜下分离(体积约1ul)，放入0.2mlEP管中，封口膜封严，置-86℃中30秒后，立即转入80℃水浴5分钟，反复5次。EP管中的1ul液体得到单克隆微囊藻DNA；直接作为DNA模板用于PCR反应。 

本专利申请由国家国际科技合作专项资助“饮用水源保护生态修复成套关键技术合作研究”(项目编号：2013DFA71340) 

International Science&Technology Cooperation Program of China(Grant No.2013DFA71340)。