[发明专利]检测单核细胞增生性李斯特菌的方法及其单抗

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测单核细胞增生性李斯特菌的方法、用于该方法的两株抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体以及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌，是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致病的、典型的胞内寄生菌，可以导致严重的人畜共患传染病，如脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状。1988年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)发表“食源性李斯特菌病劝告书”，指导全世界各国如何预防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成为新的重要的食源性疾病病原菌，WHO将其与E.coli O157、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为20世纪90年代四大食源性致病菌。该菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香肠、加工禽类、生肉、鱼、虾、烟熏鱼、生蔬菜。

目前单核细胞增生李斯特菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以单核细胞增生李斯特菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及单核细胞增生性李斯特菌快速检测产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种体外检测单核细胞增生性李斯特菌的方法。

本发明的另一个目的是提供用于上述方法的两株由同一次单克隆抗体制备过程产生的可特异性地结合于单核细胞增生性李斯特菌不同抗原位点的单克隆抗体。

本发明的另一个目的是提供产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞。

本发明的第一方面是提供了一种体外检测单核细胞增生性李斯特菌的方法，包括以下步骤：

(a)将待测样品加样于包被有捕捉抗体的固相载体，从而使待测样品中的单核细胞增生性李斯特菌与固相载体上的捕捉抗体结合，形成带有“单核细胞增生性李斯特菌-捕捉抗体”二元复合物的固相载体；所述的捕捉抗体是特异性地结合于单核细胞增生性李斯特菌的单克隆抗体1B4E7A6C9，所述的单克隆抗体1B4E7A6C9由小鼠杂交瘤细胞系1B4E7A6C9，CGMCC No.8765产生；

(b)将检测抗体加样于(a)获得的固相载体，从而形成带有“检测抗体-单核细胞增生性李斯特菌-捕捉抗体”三元复合物的固相载体；所述的检测抗体是特异性地结合于单核细胞增生性李斯特菌的单克隆抗体6D4H7C8B6，所述的单克隆抗体6D4H7C8B6由小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002产生，且所述的单克隆抗体6D4H7C8B6携带一可检测标记物；和

(c)检测三元复合物中的可检测标记物，从而确定待测样品中单核细胞增生性李斯特菌的存在与否以及存在的量。

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。

在另一优选例中，所述的可检测标记物为辣根过氧化物酶。

本发明的第二方面是提供了一种免疫球蛋白，它是特异性地结合于单核细胞增生性李斯特菌的单克隆抗体，它由小鼠杂交瘤细胞系1B4E7A6C9，CGMCC No.8765所产生。

本发明的第三方面是提供了一种产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，它是小鼠杂交瘤细胞系1B4E7A6C9，CGMCC No.8765。

本发明的第四方面是提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于检测单核细胞增生性李斯特菌。

本发明的第五方面是提供了一种免疫球蛋白，它是特异性地结合于单核细胞增生性李斯特菌的单克隆抗体，它由小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002所产生。

本发明的第六方面是提供了一种产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，它是小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002。

本发明还提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于检测单核细胞增生性李斯特菌。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1本发明的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图

Lane1：1B4E7A6C9，Lane2：6D4H7C8B6

具体实施方式

单克隆抗体