[发明专利]靶向小胶质细胞的TLR4复合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种多肽-基因复合物，具体涉及一种靶向小胶质细胞的TLR4复合物及其制备方法和在制药领域中的应用。

背景技术

脑出血是一种常见的神经系统危重症，因其高发病率，高致残率，高死亡率而受到广泛关注。随着人民生活水平的提高及老龄化的到来，脑出血发病率也呈上升趋势。大量研究表明，脑出血后存在明显的炎症反应，炎症反应参与了脑出血后继发性脑水肿和脑损害等病理过程。ICH 后血肿周围小胶质细胞等炎性细胞激活，释放TNF-α、IL-1 等致炎因子，加之血脑屏障破坏，外周血单核巨噬细胞等炎症细胞向血肿周边区聚集，由此诱发炎症级联放大反应，最终导致继发性脑损伤和神经功能缺损加剧。

Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）是一类介导天然免疫的古老受体，通过识别外源性配体（PAMPs，如细菌、真菌、病毒等）和内源性配体（DMAPs，机体损伤相关分子），并通过下游的接头信号分子MyD88或TRIF活化，导致NF-κB的激活，产生大量的炎症因子，在天然免疫中具有重要作用。大量研究发现脑出血后由血肿成分血红蛋白（Hb）及代谢产物血红素（Heme）通过作用于小胶质细胞TLR4受体，继之通过下游信号分子MyD88或TRIF活化，导致NF-κB的激活，产生大量诸如IL-1、TNF-α、IL-6的炎症因子，产生炎症损伤，最终导致ICH继发性神经功能缺损加重。因此，如果能发现通过TLR4靶向抑制小胶质细胞的药物，将会为脑出血的炎症损伤带来新的治疗策略。

CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）在中枢神经系统中主要在小胶质细胞上表达，其特异性配体CX3CL1属于CX3C家族的δ类趋化因子，主要由神经元分泌。CX3CL1通过CX3CR1受体可促进小胶质细胞的趋化、增殖、存活，细胞内钙水平的升高以及细胞因子和金属蛋白酶的分泌，这些反应能被抗CX3CR1抗体阻止。因此，如果能够有效干扰CX3CR1受体的表达，则理论上可以抑制小胶质细胞的活化，进而抑制由小胶质细胞介导的神经系统疾病的发生或恶化。

RNA干扰（RNA interference, RNAi）是大多数真核生物体内一种调控基因表达的方式，主要通过小干扰RNA（Small interfering RNA, siRNA）特异性地沉默靶基因的表达，具有高效性、特异性等优点，已被广泛应用于基因功能、细胞信号转导通路、药物靶点筛选、基因治疗等研究领域。因此，可以利用RNAi技术干扰CX3CR1受体的表达。但RNAi技术也面临一个关键问题，就是如何将siRNA有效地传递进入靶细胞。由于siRNA容易被核酸酶降解且真核细胞不易摄取外源性的裸露核酸，直接用siRNA转染细胞效率低下，因此，必须选择适当的载体包裹siRNA，以免siRNA降解并且能够辅助siRNA转染细胞。

US28是人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）编码的四个七次跨膜趋化因子受体之一，具有广谱趋化因子结合活性，在结构上与人源CX3CR1受体的同源性最高。研究发现，来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽T9可以阻断人源CX3CR1受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用，但其本身不引起趋化运动，不影响胞内信号转导和细胞自然活性；其能够引起细胞表面受体CX3CR1内化，但内化的受体部分能够再循环到细胞表面，对人源CX3CR1受体的生理功能没有明显影响。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种TLR4复合物，该复合物可以特异靶向小胶质细胞，抑制小胶质细胞的活化，进而抑制由小胶质细胞介导的中枢神经系统疾病的发生或恶化。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

靶向小胶质细胞的TLR4复合物，由Q9肽和T9肽的融合肽与TLR4通过静电作用结合而成，所述Q9肽的氨基酸序列为QQQKKKKKK，所述T9肽的氨基酸序列为LTQQVVMKF。

进一步，所述Q9肽和T9肽的融合肽由Q9肽的羧基端和T9肽的氨基端直接连接而成。

本发明的另一个目的在于提供所述靶向小胶质细胞的TLR4复合物的制备方法，是在涡旋条件下，向含有TLR4 RNAi和氯化钠的水溶液中滴加Q9肽和T9肽的融合肽溶液，滴毕，继续涡旋30~60分钟，再静置30~60分钟，即得靶向小胶质细胞的TLR4复合物。

进一步，所述TLR4 RNAi与Q9肽和T9肽的融合肽的质量比为1:1。