[发明专利]单核细胞增生性李斯特菌酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测单核细胞增生性李斯特菌的酶联免疫试剂盒。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌，是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致病的、典型的胞内寄生菌，可以导致严重的人畜共患传染病，如脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状。1988年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)发表“食源性李斯特菌病劝告书”，指导全世界各国如何预防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成为新的重要的食源性疾病病原菌，WHO将其与E.coli O157、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为20世纪90年代四大食源性致病菌。该菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香肠、加工禽类、生肉、鱼、虾、烟熏鱼、生蔬菜。

目前单核细胞增生李斯特菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以单核细胞增生李斯特菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及单核细胞增生性李斯特菌快速检测产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测单核细胞增生性李斯特菌的试剂盒。

进而，本发明提供了一种用于检测单核细胞增生性李斯特菌的酶联免疫试剂盒，所述的试剂盒含有：

(a)固相载体，所述的固相载体上包被有作为捕捉抗体的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体1B4E7A6C9，所述的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体1B4E7A6C9由小鼠杂交瘤细胞系1B4E7A6C9，CGMCC No.8765产生；

(b)容器a，所述的容器a中装有作为检测抗体的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体6D4H7C8B6，所述的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体6D4H7C8B6由小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002产生。

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。

在另一优选例中，所述的检测抗体带有可检测的标记物。

在另一优选例中，所述的可检测的标记物为辣根过氧化物酶。

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有阳性对照和阴性对照。

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的单核细胞增生性李斯特菌菌液，所述的阴性对照为灭菌的李氏增菌肉汤。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

具体实施方式

本发明人的研究表明，以单核细胞增生性李斯特菌作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，分离纯化得到两株抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体，即1B4E7A6C9，CGMCC No.8765和6D4H7C8B6，CGMCC No.8002，上述两株单克隆抗体的抗体效价可达到1:100000，其能够特异性、高效地与单核细胞增生性李斯特菌结合。以上述单克隆抗体1B4E7A6C9包被酶标反应板作为捕捉抗体，用辣根过氧化物酶标记的上述单克隆抗体6D4H7C8B6作为检测抗体，制作酶联免疫检测试剂盒。结果显示，上述单核细胞增生性李斯特菌检测试剂盒检测灵敏度达到10⁵cfu/ml，具有重复性、准确性好的优点，孔间误差小于5％，板内CV小于3％。其与出血性大肠杆菌O157:H7、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、副溶血弧菌、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽孢杆菌等共计68种病原细菌均无交叉反应。

在此基础上，本发明人进而根据双抗体夹心酶联免疫法，经过反复测试，终于获得了一种可快速、高效检测食源性单核细胞增生性李斯特菌的酶联免疫试剂盒。

抗体

本发明包括两株抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体。本发明的两株抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体可以利用小鼠杂交瘤细胞系1B4E7A6C9(CGMCC No.8765)和小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6(CGMCC No.8002)分别分泌产生。