[发明专利]一种氯基γ-生物氮肥及其制备方法

权利要求书

1.一种氯基γ-生物氮肥及其制备方法，其特征在于，包括氯基γ-生物氮肥和氯基γ-生物氮肥的制备方法；所述氯基γ-生物氮肥包括：功能性成分为γ-聚谷氨酸、麦草提取物、微生物菌剂；中量元素氮元素；所述γ-聚谷氨酸与微生物菌剂通过发酵工艺一体化制备，所述麦草提取物通过麦草嫩苗提取加工而成，所述中量元素氮元素通过相关化合物粉体获得；所述氯基γ-生物氮肥的优选配方为：γ-聚谷氨酸、麦草提取物、微生物菌剂；中量元素氮元素；优选为尿素与氯化铵；所述氮元素可来源于尿素(CO(NH₂)₂)、氯化铵(NH₄Cl)；所述氯基γ-生物氮肥各成分配比为：γ-聚谷氨酸0.1—5.0份；麦草提取物2—20份；微生物菌剂3—10份；含N量46％尿素60—80份，氯化铵10—25份。

2.根据权利要求1所述的一种氯基γ-生物氮肥及其制备方法，其特征在于，所述的γ-聚谷氨酸为γ-聚谷氨酸溶液、或γ-聚谷氨酸纯品或其盐纯品、或包含γ-聚谷氨酸的发酵培养物、或含有发酵菌剂的γ-聚谷氨酸的粉体；以其中所含的γ-聚谷氨酸计；γ-聚谷氨酸的平均分子量为5-3000KDa，优选γ-聚谷氨酸溶液。

3.根据权利要求1所述的一种氯基γ-生物氮肥及其制备方法，其特征在于，所述麦草提取物为雀麦、大麦、燕麦、青颗、乔麦的嫩苗提取物；优选大麦提取物。

4.根据权利要求1所述的一种氯基γ-生物氮肥及其制备方法，其特征在于，所述γ-聚谷氨酸的发酵制备方法为分别将地衣芽胞杆菌和枯草芽孢杆菌接入含有已灭菌培养基的发酵罐中，控制温度，PH，搅拌转速和通风溶氧，发酵一定时间得到含有聚谷氨酸的发酵液；γ-聚谷氨酸发酵液添加硅藻土，板框过滤分离去除菌体后，提取上清液，上清液加入乙醇醇沉得到γ-聚谷氨酸沉淀，清洗沉淀，分离出沉淀，用去离子水溶解，得γ-聚谷氨酸溶液；通过将二种含菌发酵液混合可制得含菌γ-聚谷氨酸发酵液溶液。其中，γ-聚谷氨酸溶液中，γ-聚谷氨酸的含量为18-30wt％，γ-聚谷氨酸的平均分子量为200-3000Kda，优选的质量百分比范围是10-20wt％。

5.根据权利要求1所述的一种氯基γ-生物氮肥及其制备方法，其特征在于，所述微生物发酵菌液的组成为：地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NX-2，二种菌株的发酵液以1:1的质量比混合。

6.根据权利要求1所述的一种氯基γ-生物氮肥及其制备方法，其特征在于，所述γ-聚谷氨酸发酵纯化工艺流程：

(a)斜面活化：将4℃斜面保存的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌菌株活化，后将其分别划线接种于LB固体平板培养基上，培养24—48h；

(b)种子液制备：挑取活化的菌落，分别接种于LB液体培养基中，30—37℃、160rpm培养20—40h；

(c)发酵培养：将培养好的种子液分别以10％的接种量接种至发酵培养基，30—37℃，转速280rpm，通风比1:1，地衣芽孢杆菌发酵24h-48h后收集发酵菌液，枯草芽孢杆菌菌株活化发酵20—40h后收集发酵菌液；

(d)γ-聚谷氨酸溶液：将得到二种γ-聚谷氨酸发酵菌液，先用硫酸调发酵液pH为2—5，加1—8％的硅藻土搅拌均匀，经板框过滤除菌，用30～40％NaOH调节pH至6.0—8.0即可得到γ-聚谷氨酸溶液；

(e)分离提纯：分别将二种γ-聚谷氨酸溶液经过乙醇沉淀，分离清洗后，加去离子水溶解，制备γ-聚谷氨酸溶液；

(f)硅藻土固定：在步骤(c)收集的二种发酵菌液中分别加入5％的硅藻土以固定菌体并促进菌体休眠,可获得含菌剂的γ-聚谷氨酸混合液；

(e)混合菌液：将步骤(f)中所述二种含菌剂混合液以1:1的质量比混合搅拌均匀，即可制得含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的γ-聚谷氨酸混合液。