[发明专利]黄瓜叶色突变基因v-1的SSR标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术辅助育种领域，特别是黄瓜叶色突变基因v-1的SSR标记及其在植物育种材料选择中的应用。 

背景技术

黄瓜(Cucumis sativus L.)是一年生攀缘性草本植物，我国是世界上黄瓜栽培面积最广、总产量最高的国家。叶色突变体是开展光合系统结构与功能及其调控机制研究的理想材料，也是遗传和育种研究中具有重要价值的基础材料。目前，黄瓜叶色突变性状的研究仅局限于黄瓜叶色突变体的发生、分类、遗传规律等方面，突变体的转色机理仍不明确。 

叶片颜色直接关系到植物的光合作用效率，与农作物产量密切相关，因此倍受育种家和遗传学家的重视。近年研究表明叶色突变体是开展植物高光效育种的理想材料。拟南芥中的GLU1基因(Karen et al.,1998)、水稻中的YGL1(Wu et al.,2007)、DET1基因(黄俊丽等，2010)以及烟草中的常绿突变体(Jordiet al.,2000))都为利用叶色突变体开展高光效育种奠定了基础。此外，由于叶色突变体容易识别，育种家也会将这种突变性状转育到杂交种亲本中，以此为标记性状进行农作物品种和杂种一代纯度鉴定，可节约成本和时间(Mochizuki et al.,2001；何冰等，2006)。 

黄瓜从20世纪70年代起就有黄绿叶、芽黄、斑驳芽黄、黄色叶等多种类型的叶色突变体被报道，这些突变体主要包括：vvi、yp(Wehner,2005)、gc(Whelan et al.,1971)、ls、cd(Whelan et al.,1972)、yc-1、yc-2、pl、albin(Whelan et al.,1973)、v(Lawrence et al.,1990)、ygl(王家训等，2000)、v-1(国艳梅等，2003)。但与拟南芥和水稻等植物相比，黄瓜叶色突变体的研究则落后许多，研究主要是围绕突变体的发生、分类、遗传规律等方面。近年来才相继有与叶色突变性状连锁的标记被报道。王全等(2010)筛选到1对AFLP显性标记，该标记可在绿叶材料中扩增出大约200bp1条特异条带。王惠哲等(2012)也找到一对与黄瓜子叶颜色相关基因的连锁的AFLP标记遗传距离为3.2cM。本课题组围绕叶色突变体v-1开展了一系列的研究工作。将叶色突变基因v-1定位在第6染色体上，并获得与其连锁的SSR和CAPS标记(Miao et al.,2011；苗晗，2011)。还分析了该叶色突变基因与其它主要性状基因的连锁关系(顾兴芳等，2005)；对该突变体光合色素变化及相关基因进行差异表达研究，并对不同黄瓜黄绿叶突变体进行了比较分析(苗晗等，2010a；苗晗等，2010b)。 

但是上述研究工作仍未实现对黄瓜叶色控制基因的克隆。获得的AFLP标记由于是随机性标记，无法将叶色基因定位在染色体上；而共显性的SSR和CAPS标记虽然与叶色基因连锁较为紧密且遗传距离较近，但是在染色体上的实际物理位置仍然较远，而且未验证这些标记用于不同遗传背景材料分子标记辅助选择的准确性，因此在黄瓜分子标记辅助育种中的实质应用有限，有待开发出与叶色基因遗传距离更近，且确实有实质应用价值的分子标记。 

发明内容

本发明基于上述领域的空白，提供了与叶色突变基因v-1紧密连锁的SSR标记，并提供了其在选择植物叶片颜色种质资源上的应用。 

本发明的技术方案如下： 

一种与黄瓜叶色突变基因v-1紧密连锁的SSR标记，其引物的核苷酸序列如下： 

SSR8^v-1-F/SSR8^v-1-R：GGCAATGGTAAAGGTTGGAA/AAGGGATGTGTGGTGTGGTT； 

所述引物扩增的与叶色突变基因v-1连锁的SSR标记特征条带为194bp，核苷酸序列如Seq ID No.1所示； 

所述引物扩增的与叶片绿色基因V-1连锁的SSR标记特征条带为206bp，核苷酸序列如和Seq ID No.2所示。 

上述SSR标记在筛选具有叶色突变基因v-1的黄瓜种质资源中的应用，其步骤如下： 

(1)采用所述SSR标记的引物对待选黄瓜品种的基因组DNA分别进行PCR扩增； 

(2)对扩增结果进行凝胶电泳检测；