[发明专利]一种促进树突细胞摄取抗原肽的多肽、促进树突细胞摄取抗原肽的纳米颗粒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物科学和药物载体领域，特别涉及一种促进树突细胞摄取抗原肽的多肽、促进树突细胞摄取抗原肽的纳米颗粒及其应用

背景技术

抗原肽是按照病原体抗原基因中已知或预测的某段抗原表位的氨基酸序列,通过化学合成技术制备而成的短肽。抗原肽可以直接作为疫苗使用也可通过树突状细胞(DC)为载体发挥作用。当直接作为肿瘤疫苗使用时，肿瘤抗原多肽首先被抗原递呈细胞(APC)，其中主要是树突状细胞DC和巨噬细胞)摄取后，经APC加工处理形成主要组织相容性分子复合物(MHC)，接着被T细胞受体(TCR)识别,产生抗原特异性信号。当以树突状细胞DC为载体时，体外培养的DC摄取抗原多肽后，经回输人体迁移到外周淋巴结，MHC-I类分子将8-10个氨基酸长度的抗原肽和递呈到CD8作为细胞表面标志的细胞毒T淋巴细胞(CTL)。未成熟的T细胞在APC递呈的多肽-MHC分子复合物和共刺激分子双信号的作用下转化为成熟的抗原特异性的效应细胞，迁移到炎症或肿瘤部位从而启动有效的杀伤反应，通过穿孔素/颗粒酶和(或)Fas/Fas-L途径溶解靶细胞。正是由于肿瘤抗原多肽的这些特性，加上多肽制作工序简单、费用低廉、化学性质稳定以及无致癌性，抗原多肽在肿瘤免疫治疗研究中受到越来越多的关注。此外，抗原多肽在抗感染、移植排斥、变态反应性疾病和自身免疫性疾病治疗中也具有广阔的临床应用前景。

抗原肽在发挥抗肿瘤功效时需以DC为载体。然而大多数抗原肽穿透力不强，不易进入DC细胞，难以形成“抗原肽-MHC I类分子”复合物，因而不能有效地激发特异性免疫反应。其次，抗原多肽分子量较小，在体内也容易降解。因此，如何使肿瘤抗原肽高效地进入DC细胞以及提高抗原多肽的稳定性，是抗原肽应用于肿瘤免疫治疗中急需解决的难题。

目前针对DC摄取抗原(抗原肽/抗原蛋白)效率较低的问题，有研究者采用细胞穿膜肽融合抗原多肽/抗原蛋白来提高其进入DC的效率，但是大多数穿膜肽存在潜在的细胞毒性。也有学者采用抗体偶联抗原肽/抗原蛋白的方法，但是此法操作步骤繁琐且费用较高。纳米载体作为一种新型的药物运载方式正逐渐被人们所关注。采用纳米技术能提升抗原的生化稳定性，不仅可以将抗原高效地运送到DC胞内，而且能同时装载光学造影剂来实现活体DC疫苗的追踪。但是，目前的DC标记方法存在一定的局限性：(1)标记效率低：绝大部分在6小时以上；(2)现有的转染试剂大部分带有高度的正电荷，具有潜在的细胞毒性和较窄的非毒性浓度区间；(3)探针在溶酶体中长时间滞留加快了造影剂的生物降解；(4)由于成熟DC具有较低的吞噬抗原能力，绝大部分标记工作都是在DC未成熟前进行，但标记之后的促成熟孵育时间极大地缩短了造影剂的有效活性期。

发明内容

本发明的目的是为解决上述问题而提供了一种高效运输抗原至DC的方法。利用该多肽以及该多肽制备得到的纳米颗粒能有效提高树突细胞对抗原肽的摄取效率，促进DC摄取抗原肽后的防治功效。

本发明所采用的技术方案是：

一种促进树突细胞摄取抗原肽的多肽，所述多肽是由α螺旋多肽、连接序列和抗原肽以共价键的形式串连而成，所述α螺旋多肽的氨基酸序列为FAEKFKEAVKDYFAKFWD，所述连接序列的氨基酸序列为GSG，所述抗原肽的氨基酸序列为KVPRNQDWL，KTWGQYWQV和ISQAVHAAHAEINEAGR。

一种促进树突细胞摄取抗原肽的纳米颗粒，所述纳米颗粒由上述多肽、磷脂、胆固醇脂、脂溶性光学探针以及PEG化磷脂等五种成分以有机结合的方式组成。

优选地，所述磷脂为DMPC(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)和PEG化磷脂。

优选地，所述脂溶性光学探针为DiR-BOA。

一种促进树突细胞摄取抗原肽的纳米颗粒的应用，所述纳米颗粒能够有效提高树突细胞对抗原肽的摄取效率，能对摄取纳米颗粒的树突细胞进行活体近红外成像，增强树突细胞的抗癌功效。

本发明具有以下优点：

(1)理化特性优良：利用动态激光光散射方法测得纳米颗粒的平均粒径为30nm左右，电镜结果显示，纳米颗粒的粒径均一、分散性好，无聚集现象。

(2)生物相容性好：制备该纳米颗粒所使用的原料为磷脂、胆固醇脂和、PEG化磷脂、促进树突细胞摄取抗原肽的多肽和近红外荧光染料DiR-BOA，这些原材料大多数都已用于临床或临床试验，具有良好的生物相容性。

(3)制备工艺简单，便于规模化生产。

(4)该纳米颗粒能适用于多种抗原肽的装载和运输。