[发明专利]一种利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法

权利要求书

1.一种利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于，整个纯化过程在无菌操作台完成，包括以下步骤：

(1)裂解样品

取待纯化样本，加入裂解液中，充分研磨至无固体组织存在的匀浆液，加入稀释液混匀备用；所述裂解液为终浓度为2M‐8M硫氰酸胍溶液与0.01‐0.05M柠檬酸钠的混合溶液，并在使用前以体积比25:1加入β‐巯基乙醇；

(2)形成含金磁微粒‐核酸复合物的混合溶液

取金磁微粒溶液置于一洁净离心管中，磁性分离后去除上清液，加入结合液后与步骤(1)得到的匀浆液混合均匀，室温下静置使其充分结合，形成含金磁微粒‐核酸复合物的混合溶液；

(3)将金磁微粒‐核酸复合物从混合溶液中分离

对混合溶液磁性分离，弃去管内液体，管内的固体成分为所得到的金磁微粒‐核酸复合物；

(4)清洗

依次采用第一清洗液和第二清洗液对收集到的金磁微粒‐核酸复合物进行清洗，其中第一清洗液是终浓度为2M‐8M氯化锂溶液和50％(V/V)乙醇混合溶液，第二清洗液是70％‐85％(V/V)乙醇；

(5)洗脱

将洗脱液与清洗后的金磁微粒-核酸复合物混合均匀，使DNA与RNA从磁性微粒上洗脱下来，在外加磁场的作用下，将磁性微粒与洗脱下的总核酸分离，收集上清液，即为纯化得到的总核酸。

2.根据权利要求1所述的利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于：步骤(1)中的稀释液为终浓度0.01M‐0.1MTris‐HCl、0.001M‐0.010M EDTA以及质量分数0.1％‐0.5％SSC和0.2％‐0.8％SDS的混合溶液。

3.根据权利要求1所述的利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于：步骤(2)中的结合液为无水乙醇。

4.根据权利要求1所述的利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于：步骤(5)中的洗脱液为无核糖核酸酶水。

5.根据权利要求1所述的利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于：所述待纯化样本的质量≤10mg。

6.根据权利要求1所述的利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于：步骤(4)中采用第二清洗液进行两次清洗以去除盐离子。

7.根据权利要求1所述的利用金磁微粒纯化动物微量组织中总核酸的方法，其特征在于：采用的金磁微粒是以磁性纳米微粒为核、在核表面组装纳米金或银粒子形成的磁性复合微粒；其中所述的磁性纳米微粒包括Fe₃O₄、γ-Fe₂O₃或者单质Fe、Co、Ni粒子聚集体、或者经过修饰后形成的Fe与其他金属元素形成的正铁酸盐粒子聚集体。

8.一种适用于动物微量组织及临床穿刺组织样本的总核酸纯化试剂盒，其特征在于：包括分隔放置的如权利要求1中所述裂解液、稀释液、结合液、第一清洗液、第二清洗液、金磁微粒溶液和洗脱液。