[发明专利]一种从海藻中提取亲糖蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种亲糖蛋白的制备方法，具体涉及一种从海藻中提取亲糖蛋白的方法。

背景技术

海藻生长在海洋中，是植物中的隐花植物。无根本意义上的根茎叶，通过袍子来繁殖。有一些海藻类可以入药，如海带、紫菜、裙带菜、石花菜、龙须菜等。最常见的海藻是大型的海草、绿藻、红藻、褐藻等。在水深50公尺以内形成明显的生长带。生长在高潮线上的海藻长暴露在空气中，低潮线以下的海藻则不能长期暴露于空气中，所以不能近海岸线生长。如墨角藻、巨藻、海囊藻和海带藻等则只能生长在18度以下的冷水水域。它们一般被认为是简单的植物，由于藻类的结构简单，所以有的植物学家将它跟菌类同归于低等植物的“叶状体植物群”。海藻中具有增强免疫力和抗癌细胞的物质，如多糖类，红藻、紫菜、海萝等中有含有这一类物质。海藻中还含有多种食物纤维，能够帮助消化和促进废物排泄等功能。海藻中含有多种维他命，对心脏病等各种病症都有着一定的缓解作用。其含有烟酸碱能够治疗关节炎、偏头痛和失眠等症状。其含有的氨基酸、脂肪酸、无机元素等对人体健康有着一定的良性影响。

海藻还含有一种特殊的蛋白质称为亲糖蛋白，它对特定糖类具有亲和性而与之非共价结合。亲糖蛋白和细胞膜糖分子结合后会造成细胞沉降现象，因此是一种凝集素。研究发现海藻的亲糖蛋白不但可以凝集红血球、肿瘤细胞、淋巴球、酵母、海洋细菌及单细胞蓝绿藻，也能促进小老鼠及人体淋巴球分裂作用。有些海藻亲糖蛋白能抑制肿瘤细胞的增殖，如抑制白血病细胞株及老鼠乳癌细胞的增长。又如将海藻亲糖蛋白予以染色并结合在癌细胞上，便可以诊断或追踪人体内癌细胞的分裂及转移情形。台湾将海藻亲糖蛋白应用在人体保健及医药方面的研发，多数尚在开始的阶段，不如多糖类成熟，有待积极研究开发。可预期的是海藻亲糖蛋白未来在免疫系统机能诊断、肿瘤形成及转移诊断及其它临床应用上，具有很大潜力。当前首先应加强海藻活性种类筛选，进而分离纯化亲糖蛋白，并分析其生化特性及构造，以供后续研究及扩大未来应用，提高其在医药及保健上的价值。目前，针对从海藻中提取亲糖蛋白的研究报道比较少。

发明内容

本发明提供了一种工艺成熟、适合生产的从海藻中提取亲糖蛋白的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种从海藻中提取亲糖蛋白的方法，包括下述步骤：

a.原料处理：将新鲜海藻洗净后加入纯净水绞碎；

b.细胞破碎：将绞碎的海藻中放入高压罐中，加压至3kgf/cm2，并保持10-20min，使其压力均匀，然后在0-3秒突然使压力降至Okgf/cm2，过滤，将滤液用超声波处理20-30min，作用温度40-50℃，功率为200-300W，过滤，得到海藻蛋白提取液；

c.蛋白粗提：向得到海藻蛋白提取液中，加入硫酸铵溶液，使得硫酸铵的饱和度达到25％，静置10-15分钟，继续加入硫酸铵溶液，使得硫酸铵的饱和度达到50％，静置10-15分钟，收集沉淀；

d.蛋白纯化：将收集的沉淀通过葡聚糖凝胶柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液；

e.将流出液冷冻干燥后，得成品。

本发明所述的海藻优选海草、绿藻、红藻和褐藻。

优选的，步骤a中海藻和纯净水的重量比为1：1-4；

优选的，步骤b中超声波处理时间25min。

优选的，步骤b中超声波作用温度45℃。

优选的，步骤b中超声波功率250W。

优选的，步骤c中葡聚糖凝胶柱的型号SephadexG-50、SephadexG-75、SephadexG-100和SephadexG-200。

采用本发明的方法以新鲜海藻为原料提取亲糖蛋白，与现有技术相比，本发明的优点：

1、本法明方法将超声波、高压等先进技术综合使用来制备海藻亲糖蛋白，工艺创新，适合大生产。工艺成熟、可靠，该法能够节约成本、减少能耗，提高提取效率。

2、海藻中亲糖蛋白属于胞内蛋白质，因此要进行亲糖蛋白的提取前必须先使其溶出，故须要破碎其细胞壁、细胞膜以使蛋白溶于提取液中。目前常用的使细胞破碎的方法有：反复冻融法、化学试剂处理法、溶胀法、和组织捣碎法等。但是在实际操作时反复冻融法操作起来相对简便，但是一般只适用于少量样品的处理；化学试剂处理法，比如用十二烷基磺酸钠破坏细胞膜提取蛋白，但是由于该法加入了化学试剂势必会增加后期蛋白纯化的难度，而且操作不当也极易引起蛋白质变性；溶胀法在蒸馏水中需要浸泡至少lOd，或在低盐溶液中也要浸泡3-4d，周期过长而少用。本发明采用超声波、高压技术来进行细胞破碎，适合工业化生产。