[发明专利]sIL-4R-NAP融合基因

说明书

技术领域

本发明涉及基因领域，尤其涉及一种融合基因。

背景技术

支气管哮喘，简称哮喘，是严重困扰人类健康的慢性疾病，全球哮喘患者已多达3亿多人，我国近10年来儿童哮喘发病率上升了60%，目前尚无根治办法。临床上常用吸入糖皮质激素（GC）和β2受体激动剂等缓解哮喘的临床症状，但价格昂贵而且长期使用易引起诸多不良反应，如生长迟缓、发声困难、骨密度降低等。哮喘是一种免疫失调性疾病，有较多治疗药物在开发，如可溶性白介素4受体（sIL-4R），可阻断IL-4信号、起到一定的抗哮喘作用。但哮喘受到一个复杂信号网络的调控，例如仅仅阻断IL-4信号但IL-13也能补偿IL-4的部分生理学功能，维持哮喘的病理学特征。

发明内容

本发明解决的技术问题是，提供了一种融合基因，给药的抗哮喘效果非常显著。

一种融合基因，其包含编码可溶性白介素4受体（sIL-4R）的片段a和编码幽门螺旋杆菌中性粒细胞激活蛋白（本文简称HP-NAP蛋白）的片段b。

优选的，所述片段a含有SEQ ID No：1所示片段。

优选的，所述片段b含有SEQ ID No：2所示片段。

优选的，所述基因还含有连接片段a和b的连接片段c，片段c不干扰片段a或b的功能,且片段c编码柔性肽（本领域又称连接肽、柔性连接肽，用以防止连在其两端的蛋白在空间构象上的相互干扰；以片段c为例，其可防止片段a表达的sIL-4R和片段b表达的HP-NAP在空间构象上的相互干扰，如防止sL-4R和HP-NAP形成空间高级结构而影响功能的发挥）。

优选的，所述片段c含有SEQ ID No：3所示片段。

优选的，所述基因的序列从5＇端到3＇端由SEQ ID No：1、SEQ ID No：3、SEQ ID No：2顺序连接而成（下文将该基因称为sIL-4R-NAP基因，其编码的蛋白为sIL-4R-NAP蛋白）。

重组载体，包含任一上述形式的融合基因。融合基因可转入任何可用的载体中，如pcDNA3.1(+)（invitrogen公司）。重组载体可制成核酸疫苗（如DNA疫苗）或药物组合物，通过在宿主内表达融合sIL-4R与HP-NAP的蛋白以调节代谢、治疗/预防疾病。

目前有较多抗哮喘药物在开发，本发明另辟蹊径，通过反复探索，惊奇地发现，包含编码可溶性白介素4受体（sIL-4R）的片段a和编码中性粒细胞激活蛋白（HP-NAP）的片段b的重组载体，通过OVA诱导的小鼠哮喘模型验证，至少在以下任一方面均有显著的效果：

减少气道周围炎症细胞的浸润、减少支气管肺泡灌洗液BALF中细胞总数、降低所述BALF中嗜酸性粒细胞数目、降低肺组织嗜酸性粒细胞趋化因子-2eotaxin-2的mRNA水平、上调肺组织中IFN-γ水平、降低肺组织中IL-4水平、降低肺组织中IL-5的mRNA水平、降低血浆中介导过敏反应的IgE水平。

另外，相比蛋白药物，DNA疫苗的构建变得相对容易，DNA疫苗避免了蛋白质纯化的复杂工艺，并且DNA疫苗在个体内的持续表达也优于传统的蛋白质给药方式。

附图说明

图1为三酶切鉴定质粒pcDNA3.1-sIL-4R-NAP的电泳图，泳道M：DNA marker DL10,000(Takara公司）；泳道1或2：质粒pcDNA3.1-sIL-4R-NAP用HindⅢ、BamH Ⅰ、Xho Ⅰ三酶切产物；泳道3：sIL-4R基因PCR产物；泳道4：Linker-HP-NAP基因PCR产物；

图2为BALF细胞计数比较，纵坐标表示细胞总数，单位为10⁵/ml，横坐标对应于各实验组；

图3为BALF中的嗜酸性粒细胞计数比较，纵坐标表示嗜酸性粒细胞数目，单位为10⁵/ml，横坐标对应于各实验组；

图4为肺组织切片H&E染色比较；

图5为IL-4比较图，纵坐标表示IL-4含量，单位为pg/ml，横坐标对应于各实验组；

图6为IFN-γ比较，纵坐标表示IFN-γ含量，单位为pg/ml，横坐标对应于各实验组；

图7为IgE水平比较，纵坐标表示IgE水平，单位为ng/ml，横坐标对应于各实验组；

图8为IL-5的mRNA表达水平比较，纵坐标表示IL-5的mRNA相对NS组的表达水平，横坐标对应于各实验组；