[发明专利]一种蒙药玉簪花的指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种蒙药玉簪花的指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。 

背景技术

近年来国际植物药市场需求量不断增长，我国植物药资源面临着药材原料严重缺乏的现状。中蒙药原料药材由于受基源、产地环境气候、采收时间、加工方法等一系列过程的影响，所含成分也往往相差很大，质量真实性、均一性、稳定性很难保障。同时在巨额利润的诱惑下，不少药商不顾消费者的生命安全，以假充真，以次充好。中蒙药质量问题成为中蒙药国际化的一个技术瓶颈。目前中蒙药的质量控制主要以已知的一种或几种活性成分或指标成分为控制质量的指标，通过定性和定量的分析，判断药品的真伪优劣。但是中蒙药的疗效既不是任何单一活性成分的作用，也不是多种成分活性的简单相加。所以，宏观地综合分析已成为中蒙药质量控制发展的必然趋势，现阶段色谱指纹图谱就是适应这一特点的质量控制模式，能够比较全面地、综合地反映药材中所含化学成分。 

蒙药玉簪花现行标准载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分册)，其中化学方面仅有黄酮类成分的理化鉴别，无薄层鉴别项，也无含量测定项。简单的质量控制方法致使该药材的使用、生产和流通都受到限制，临床用药的有效性和安全性没有保证。目前本课题组和国内相关课题组对玉簪花的质量控制方面进行了相关的研究，建立了药材中总黄酮、总皂苷的含量测定方法及单一成分的薄层鉴别和含量测定方法。无论是法定的现行标准还是目前已有的标准研究，都未能从整体的角度全面综合地反映玉簪花药材的化学内涵和质量。 

本发明利用高效液相色谱法构建了蒙药玉簪花的色谱指纹图谱分析方法，并通过多批次药材的分析确定了该药材的标准指纹图谱。此方法简单方便、快速有效，可用于从宏观角度全面评价蒙药玉簪花药材的质量。 

发明内容

本发明的目的在于克服上述玉簪花药材质量评价的现有技术缺陷，提供一种蒙药玉簪花的指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，用于宏观评价玉簪花药材质量的真实性、优良性和稳定性。该发明方法简单方便、快速有效，可用于从宏观角度全面评价蒙药玉簪花药材的 质量，对于提高玉簪花药材及其成方制剂质量，促进该药材及其制剂的现代研究和深层次开发利用具有重要意义。其具体技术方案为： 

在蒙药玉簪花现有药效物质基础研究结果的基础上利用高效液相色谱法构建蒙药玉簪花的色谱指纹图谱分析方法，并结合多批次玉簪花药材的指纹图谱分析，确定该药材的标准指纹图谱。本方法的特点：简便、稳定、精密度高、重现性好，可全面、客观、有效反映蒙药玉簪花药材的质量。 

一种蒙药玉簪花的指纹图谱的建立方法，包括以下步骤： 

(a)供试品溶液的制备：将干燥的玉簪花药材粉碎，过40目筛，取药材粉末约0.5g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，分别精密加入40％～100％甲醇或40％～100％乙醇40～140mL。分别超声提取30～60min或回流提取30～75min，滤过，洗渣三次，每次10mL，合并滤液。减压回收溶剂至于，用10％甲醇定容至25mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀。微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，备用。 

(b)对照品溶液的配制：分别取下列八种对照品适量，用10％甲醇溶解定溶，制成一定浓度的溶液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，备用。 

1.山奈酚-3，7-二-O-β-D-吡喃葡糖苷 

2.山奈酚-3-O{β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-[a-L-吡喃鼠李糖基(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 

3.山奈酚-3-O-芸香糖苷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 

4.山奈酚-3-O{β-D-葡萄糖基(1→2)-[β-D-葡萄糖基(1→3)]-[a-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷} 

5.山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷 

6.山奈酚-3-O{β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-[a-L-吡喃鼠李糖基(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷} 

7.山奈酚-3-O-芸香糖苷 

8.7-甲氧基-山奈酚-3-O-芸香糖苷 

(c)色谱条件：色谱柱：各种反相C₁₈柱；流动相：甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-水、乙腈-水-磷酸；洗脱梯度：5％B(0min)～100％B(90min)；检测波长：220～400nm；柱温：20～35℃；流速：1mL/min；进样量：20μL。