[发明专利]约氏乳酸杆菌BS15及其在预防和治疗非酒精性脂肪肝中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株乳酸杆菌属的新菌株，及其在预防和治疗非酒精性脂肪肝中的应用。

背景技术

随着生活水平的提高，肥胖以及与肥胖相关的非酒精性脂肪肝（NAFLD）已经成为了世界卫生组织亟待解决的问题。在过去的20年中，NAFLD在成年人中的比例已经增长到20-30%，在儿童中的比例增长到3-10%。

目前，已有研究发现大黄素，VC和VE对NAFLD具有一定改善作用。然而，NAFLD是一种慢性代谢性疾病，长期服用药物治疗会对机体造成严重的伤害。因此绿色环保生物制品的开发成为了应对NAFLD重要技术手段。国内外已有大量的研究报道证实益生菌具有抗癌，增强免疫，抗肥胖等重要作用。但对益生菌尤其是约氏乳酸杆菌BS15在预防和治疗NAFLD方面的研究几乎未见报道。

发明内容

针对上述课题，本发明以阿坝州红原草原传统酸奶中的微生物菌群为研究对象，分离出了具有耐酸耐胆盐分解胆固醇的益生菌，并对其在预防和治疗NAFLD方面的功效做了进一步研究。

本发明的目的是提供一株约氏乳酸杆菌BS15 CCTCC NO: M2013663；

本发明的另一目的是公开上述约氏乳酸杆菌BS15在预防和治疗NAFLD中的应用。

具体讲，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

采集阿坝州红原草原传统酸奶，用MRS培养基进行筛选和鉴定，得到一株具有耐酸耐胆盐分解胆固醇能力的益生菌。通过PCR扩增出该菌株的16S rDNA片段，经测序获得目的基因序列。用美国生物信息学中心（NCBI）的BLAST程序对所初步获得的该菌株的16S rDNA序列进行登录，获得登录号为HM772969.1 (GenBank(Http: //ww w.ncbi.nlm.nih. gov/ blast/)，与已收录的序列进行核苷酸同源性比较。经过微生物学分类鉴定，确定该分离的菌株为约氏乳酸杆菌(Lactobacillus johnsonii) BS15，该菌株已于2013年12月13日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，保藏编号为：CCTCC NO: M2013663。

本发明约氏乳酸杆菌(Lactobacillus johnsonii) BS15（以下简称为“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”）按照常规甘油冷冻方法保藏。

本发明提供含“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”的菌液的制备方法：

将活化3代的“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”菌液按2%接种量接种MRS培养液，37 ℃厌氧静置培养36 h后活菌计数，3000r/min离心15min保留菌泥，用PBS缓冲液（pH7.0）稀释成2×10⁸和2×10⁷ CFU/0.2mL，置-20℃备用，每周制备一次菌液，灌胃前将菌液置25℃温水活化后使用。

本发明也提供“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”在预防和治疗非酒精性脂肪肝中的应用。根据国家保健食品管理法规的有关规定，采用雄性ICR（Institute of Cancer Research）小鼠分别饲喂普通饲料、高脂饲料和灌胃含“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”的菌液。实验分为对照组、高脂组、L-BS15组和H-BS15组，每组10只小鼠。预饲期为7d，正试期为119d，每天8:00、14:00、20:00进行投料，每天8:00进行灌胃，自由饮水。在实验后测定肝重、体重，血清中游离脂肪酸（FFA）、谷丙转氨酶（ALT），肝脏线粒体内过氧化氢酶 (CAT)、过氧化氢（H₂O₂）、谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px)、丙二醛(MDA) 、总超氧化物歧化酶 (T-SOD)活性，肝脏线粒体内细胞色素c、解耦连蛋白（UCP）-2、β-1 F₀-ATP 合酶，肝脏细胞凋亡率及肝脏组织切片等指标来判断“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”是否具有预防和治疗非酒精性脂肪肝的作用。

附图说明

图1为本发明“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”的总DNA的0.8%琼脂糖凝胶电泳检测图，其中M为λ/HindIII DNA Marker，O为阴性对照；

图2为本发明“约氏乳酸杆菌CCTCC 2013663”的16S rRNA PCR产物的1.0%琼脂糖凝胶电泳检测图，其中M为D2000，O为阴性对照；