[发明专利]用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液及应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质分离纯化技术领域，具体地指一种用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液及应用。

背景技术

从鸡蛋中提取的生物活性物质价值极高，在医药、食品、化工、生物等诸方面具有广泛的用途，是我国近20年来蛋品科学研究开发中的热点。近年来，随着蛋品研究的深入和分离技术的提高，人们开始对鸡蛋中各种蛋白质组分进行研究，尤其卵黄球蛋白中的γ-卵黄免疫球蛋白(简称IgY)，又称鸡卵黄抗体。卵黄球蛋白是蛋黄中的重要蛋白质之一，其具有制备过程无需采血，不与类风湿因子以及哺乳动物的补体发生交叉反应等优点，在疾病预防、食品添加剂和医学领域应用广泛。

分离纯化IgY的技术中通常采用水稀释法、有机溶剂抽提沉淀法、高分子聚合物沉淀法、超滤、层析等方法提取分离IgY。虽然这几种方法都能在一定程度上达到分离的目的，但仍然存在诸多缺点，如其中的色谱法、超滤法虽然得到的IgY纯度较高，但操作复杂、费时较长，对操作条件要求也比较苛刻，而且得到的产率不高；有机溶剂抽提法、高分子聚合物如聚乙二醇沉淀法虽然得率高但易造成蛋白质分子的变性和失活；水稀释法虽然得率较高、安全性高但得到的蛋白纯度不理想。因此，寻求操作简单、生产周期短、能耗小、操作条件温和，且易于放大的分离方法一直是研究和开发的重要课题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有分离纯化IgY的技术中存在操作复杂、费时、产率低、蛋白质易变性的缺陷，提供一种操作简单、成本低、产率高且蛋白质活性保存完好的用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液及应用。

为实现上述目的，本发明所设计的用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液，其各组分及重量百分比组成为：0.05～0.2%果胶、0.01～0.15%多糖、3～10%硫酸铵，余量为水；所述多糖选自卡拉胶、羧甲基纤维素、甲基纤维素、硫酸葡聚糖中的一种。

上述复合型去脂液中各组分及重量百分比的优选组成为：0.05～0.15%果胶、0.05～0.1%多糖、3～5%硫酸铵，余量为水。

优选地，所述多糖为卡拉胶，重量百分比含量为0.1%。

更优选地，所述果胶的重量百分比含量为0.1%、硫酸铵的重量百分比含量为3%。

优选地，所述复合型去脂液中还包含有5～20μM的氯化钙。加入了CaCl₂的去脂液提纯IgY的效果无论是提取量还是纯度都得到明显的提高，可能原因是钙离子与多糖相互作用，促进多糖与脂蛋白的结合。

更优选地，所述复合型去脂液中还包含有10μM的氯化钙。

本发明还提供了一种上述复合型去脂液提取鸡卵黄免疫球蛋白的方法，其步骤如下：

（1）将鸡蛋预处理，分离得到蛋黄液；

（2）将蛋黄液与用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液按体积1：1～10的比例混合均匀，同时调节pH至4.5～6.0，静置时间为2～12h，得到混合液；

（3）将混合液在8000～12000×g的转速下冷冻离心20min，取上清液；

（4）向上清液中边搅拌边加入硫酸铵，至硫酸铵在上清液中的终浓度达到20～35wt%，充分搅拌后，在10000～14000×g的转速下冷冻离心25min，收集沉淀；

（5）将沉淀溶于蒸馏水，搅拌后，4～10℃透析除盐，冷冻干燥干即得鸡卵黄免疫球蛋白。

优选地，所述步骤（1）中鸡蛋预处理的方法为：选取新鲜鸡蛋，采用蛋清蛋黄分离器，分离得到蛋黄，用蒸馏水将蛋黄冲洗干净，并置于滤纸上来回滚动吸干之后，刺破蛋黄膜，收集蛋黄液。

优选地，所述步骤（2）为将蛋黄液与用于鸡卵黄免疫球蛋白提取的复合型去脂液按体积1：6～8的比例混合均匀，同时调节pH至4.8～5.2，静置时间为6～8h，得到混合液。