[发明专利]一种百合斑驳病毒胶体金免疫层析检测试剂卡及制备方法

权利要求书

1.一种百合斑驳病毒胶体金免疫层析检测试剂卡，包括：试剂卡槽(1)，衬板(10)，样品垫(6)，胶体金结合垫(7)，硝酸纤维素膜(8)，吸水滤纸(9)，其特征在于：试剂卡槽(1)包括上壳体和下壳体，上壳体和下壳体通过卡扣连接，上壳体设有第一孔洞(2)和第二孔洞(3)，样品垫(6)置于第一孔洞(2)下方，硝酸纤维素膜(8)置于第二孔洞(3)下方，胶体金结合垫(7)上含有金标探针，衬板(10)固定于试剂卡槽(1)中，样品垫(6)、胶体金结合垫(7)、硝酸纤维素膜(8)和吸水滤纸(9)依次排列连接于衬板(10)上表面，硝酸纤维素膜(8)上设有检测线(4)和对照线(5)，检测线(4)上包被的是兔抗LMoV多克隆抗体，对照线(5)上包被的是羊抗兔IgG纯化抗体，兔抗LMoV多克隆抗体合适包被量为1.5～2.0μg蛋白，金标探针合适抗体标记量为18μg/mL，羊抗兔IgG纯化抗体合适包被量为2.0～2.5μg蛋白。

2.根据权利要求1所述的百合斑驳病毒胶体金免疫层析检测试剂卡，其中在用所述百合斑驳病毒胶体金免疫层析检测试剂卡检测时，在所述第一孔洞处加入少量百合样品的待检溶液，对比检测线和对照线的颜色，即可判定被检测百合是否感染了百合斑驳病毒。

3.根据权利要求2所述的百合斑驳病毒胶体金免疫层析检测试剂卡，其中将少量待检溶液加入所述第一孔洞处5～10分钟后，若待检溶液中含有LMoV，检测样品经过所述胶体金结合垫时，LMoV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述检测线方向渗移，当接触到所述检测线时与兔抗LMoV多克隆抗体发生抗原抗体结合反应而被截留下来，形成可见的棕红色条带；未与检测线结合的复合物继续向所述对照线方向渗移，当接触到所述对照线时与羊抗兔IgG纯化抗体结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当检测线和对照线上均出现棕红色的条带时，则判定被检样品感染了百合斑驳病毒。

4.根据权利要求2所述的百合斑驳病毒胶体金免疫层析检测试剂卡，其中将少量待检溶液加入所述第一孔洞处5～10分钟后，若待检溶液中不含LMoV，检测样品经过所述胶体金结合垫时，则不能与金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述检测线时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述对照线方向渗移，当接触到所述对照线时与羊抗兔IgG纯化抗体结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当检测线没有颜色变化而仅对照线出现棕红色的条带时，则判定被检样品没有感染百合斑驳病毒。

5.一种如权利要求1-4所述百合斑驳病毒胶体金免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)兔抗LMoV多克隆抗体的制备；(2)胶体金标记兔抗LMoV多克隆抗体的制备：分别取半径为30nm的胶体金10mL及兔抗LMoV多克隆抗体180μg，在PH7.4的条件下通过磁力搅拌震荡使其结合，加牛血清白蛋白(BSA)作为稳定剂，且使得终浓度为1％，采用高速离心法除去未结合的多克隆抗体和未稳定的胶体金颗粒及其凝聚物，在离心管底部的深红色沉淀即为胶体金-抗体结合物；(3)胶体金结合垫的制备：用1/10标记前胶体金溶液体积的重悬液悬浮胶体金-抗体结合物，离心，上清液用喷涂设备涂于玻璃纤维素膜上，37℃烘干，制成胶体金结合垫；(4)免疫层析膜的包被：在硝酸纤维素膜上分别包被兔抗LMoV多克隆抗体检测线和羊抗兔IgG纯化抗体对照线，每条线宽2mm，兔抗LMoV多克隆抗体合适包被量为1.5～2.0μg蛋白，羊抗兔IgG纯化抗体合适包被量为2.0～2.5μg蛋白；(5)试剂卡的组装：将聚氯乙烯衬板作为支撑载体固定于试剂卡槽下壳体中，然后样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸依次排列连接于衬板上表面，再将试剂卡槽上壳体与下壳体通过卡扣连接，就得到LMoV胶体金免疫层析检测试剂卡。