[发明专利]一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种分子标记，特别是涉及一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记。本发明还涉及扩增该分子标记的引物、该分子标记和引物在烟草PVY抗病基因定位或烟草遗传育种中的用途。

背景技术

马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）能侵染34个属170多种植物，对茄科作物（如：烟草、马铃薯、辣椒、番茄等）危害较重。PVY侵染烟草的病害又称为烟草脉斑病，是一种世界性的流行病害，由于缺乏抗病主栽品种和综合防治措施难以落实，在我国烟区危害严重。PVY的侵染可使烟草产量减少7%-18%，产值减少11%-80%。1989年，烟草脉斑病导致加拿大烟草业直接经济损失达100万美元。1993年脉斑病在我国山东烟区开始流行，到1998年成为第一大烟草病害。PVY在河南、陕西、黑龙江、辽宁、安徽、贵州和云南的局部烟区的危害严重，给烟叶生产带来较大损失。

选育抗PVY的烟草品种是防治该病最经济有效的方法。美国G.Koellent对栽培种Virgin A的变种Virgin A Mutant(VAM)的研究后发现VAM的PVY的抗性主要是由隐性单基因（va）控制的，对PVY的多个株系、特别是坏死株系具有抗性。Noguchis S.等对VAM遗传位点的研究后发现VAM对PVY的抗性是由于大段染色体缺失造成的。这个发现与VAM来源于X-射线突变体相吻合。是由于对PVY感病的基因缺失造成的。烟草育种利用的PVY抗性重要来源之一为VAM。

为选育抗病品种，国内外鉴定出多个抗PVY的种质资源，如VAM、V.SCR等，并育成抗病白肋烟品种TN86、TN90和烤烟品种NC55、NC102等。大部分抗源的抗性表现为隐性基因（va）控制，是由于对PVY感病的基因缺失造成的。并开发出与Va位点相关的分子标记（RAPD、SCAR）（Noguchi S.,Mol Gen Genet,1999,262:822-829;Julio et al.,Theor Appl Genet.2006,112(2):335-346.）。烤烟种质RY5对PVY坏死株系（PVY^N）的抗性符合孟德尔一对隐性基因控制的质量性状的遗传模型，已报道与抗病基因对应的显性等位基因位点（Va）紧密连锁的RAPD标记O12V3₆₉₅与SCAR标记PVY ME1（王贵等，分子植物育种,2012,10(1):97-103）。文献报道的RAPD标记和SCAR标记，与PVY抗性的连锁距离分别为2.10cM和2.52cM。与PVY抗性的连锁距离较远，将导致利用标记数据判断抗性表型误差较大。RAPD标记存在扩增产物的特异性不高，非目标条带干扰结果判断、PCR扩增需要循环数多达45个循环等不足。

发明内容

为克服现有分子标记的不足，本发明提出一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记，采用与PVY隐性抗病基因本身序列及其侧翼序列，开发的分子标记与PVY的抗性连锁距离更近；PCR扩增条件更简便。因此，利用本发明的分子标记判断抗性表型更的准确性更高。利用本发明的烟草PVY隐性抗病基因的分子标记进行辅助选择育种，对加快育种进程和提高我国烟草育种水平起到促进作用。

本发明的另一目的是提供一种可用于PCR扩增与烟草PVY隐性抗病基因紧密连锁的分子标记的引物对，以及由该引物对扩增获得的分子标记。

本发明的再一目的是提供上述分子标记在烟草PVY隐性抗病基因检测的用途以及在烟草育种辅助选择中的用途。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种鉴定烟草PVY抗性的分子标记，所述分子标记含有SeqID No.1所示序列；优选的所述分子标记具有Seq ID No.1所示序列。

本发明还公开了一种扩增与鉴定烟草PVY抗性的分子标记的引物对，所述引物对的CF2含有Seq ID No.2所示序列，GR11含有Seq ID No.3所示序列；优选的所述CF2具有Seq ID No.2所示序列，GR11具有Seq ID No.3所示序列；

Seq ID No.2：5’-TTTGGTTTGATAATCCTATGGCT-3’；

Seq ID No.3：5’-GAAGGCAAGATATTCAGGAGCT-3’。

本发明还公开了一种与烟草PVY隐性抗病基因紧密连锁的分子标记，所述分子标记是由上述的引物对以感PVY烟草基因组DNA为模板经PCR扩增得到的。

优选的由上述引物对扩增得到的分子标记含有Seq ID No.1所示序列。