[发明专利]具有群体感应抑制作用的芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物和水产养殖技术领域，具体而言，涉及具有群体感应抑制作用的芽孢杆菌及其应用。 

背景技术

据不完全统计，全国水产养殖病害种类高达200余种，其中生物源性疾病中，细菌性疾病占57.63%。2012年单纯由于病害而导致的水产业的直接经济损失达到140亿元，严重制约了水产养殖业的健康发展和经济效益的提升。近年来，由于传统的抗生素等药物长期使用后会造成细菌的耐药性、药物残留以及对环境产生危害；因此，抗菌药作用新靶点的发现和新型抗菌药物的研发显得尤为重要。20世纪70年代Nealson首次在费氏弧菌(Vibrio fischeri)和哈氏弧菌(Vibrio harveyi)两种发光细菌中发现细菌细胞间存在群体感应系统。群体感应(Quorum sensing，简称QS)是指细菌能自发产生并释放一些特定的信号分子，通过对自身浓度的变化感知，进而调控相关基因的表达。研究表明，细菌群体感应系统控制着包括生物被膜形成、有害毒素产生、致病因子释放、胞外多糖产生等一系列的细菌毒力行为,因此，调控QS系统对细菌毒力的表达，有望成为控制细菌感染的有效武器。研究表明引起水产动物细菌性病害的病原菌如嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌等其毒力因子的表达均受到群体感应信号分子的调控；因此，从群体感应入手，控制细菌性病害应用前景广阔。 

芽孢杆菌属是革兰氏阳性菌，严格需氧或兼性厌氧。该属细菌的重要特性是能够产生对不利条件具有特殊抵抗力的芽孢。但是多数具有溶血特性，部分蜡状芽孢杆菌因为其溶血性引起食物中毒；虽然枯草芽孢杆菌224活菌体制成的生物制品-白天鹅气雾剂，具有改善创面微生态环境和良好的抗感染、促进创面愈合作用，但因具有溶血性，严重地限制了其在临床上的应用。因此如何获得不携带溶血性致病因子的安全芽孢杆菌是本领域技术人员亟待解决的技术问题。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术所存在的上述不足，提供一种具有群体感应抑制作用的芽孢杆菌及其应用。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案： 

本发明一方面涉及一种具有群体感应抑制作用的芽孢杆菌，其特征在于所述的芽孢杆菌为具有与保藏号为CCTCC NO：M2014049的地衣芽孢杆菌95％同源性的地衣芽孢杆菌；优选的，所述的芽孢杆菌为保藏号为CCTCC NO：M2014049的地衣芽孢杆菌或其直接传代物。 

在本发明的一个优选实施方式中，所述的具有群体感应抑制作用的芽孢杆菌来源于养殖塘底泥或异育银鲫肠道。 

本发明另一方面还涉及一种芽孢杆菌制剂，其特征在于含有有效量的上述芽孢杆菌。 

在本发明的一个优选实施方式中，所述的芽孢杆菌制剂为液体制剂或固体制剂。 

本发明另一方面还涉及上述芽孢杆菌制剂在水产养殖中的应用。 

本发明另一方面还涉及上述芽孢杆菌制剂在制备水产养殖抗菌制剂中的应用。 

本发明的芽孢杆菌为不带有溶血性的群体感应抑制芽孢杆菌，为进一步探讨群体具有群体感应抑制作用的芽孢杆菌对细菌性病害的防治奠定基础。 

附图说明

图1、28℃芽孢杆菌菌株溶血性； 

图2、37℃芽孢杆菌菌株溶血性； 

图3、“H”划线法T-1褪色效果（黑色箭头所示）； 

图4、二层琼脂法T-1褪色效果； 

图5菌株T-1的生长曲线； 

图6T-1活菌数量-OD600标准曲线； 

图7T-1活菌数量、芽孢数量与时间的关系。 

微生物信息 

本发明的一个优选实施方式以及具体实施方式中所使用的芽孢杆菌T-1为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，已经保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO.M2014049，保藏地址为：中国武汉市武汉大学，保藏日期为2014年2月27日。 

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明的方法作进一步详细地说明。 

1.材料与方法 

1.1材料 

1.1.1实验菌株来源与培养 

紫色杆菌购买自美国ATCC；将冻干粉保藏的紫色杆菌接种于LB液体培养基中活化，26℃培养24h；用接种环占取菌液在营养琼脂平板中划线分离，挑取单个紫色菌落在营养琼脂斜面上划线，26℃培养48h石蜡保存备用。 

1.1.2培养基与试剂