[发明专利]一种甲基营养芽孢杆菌及其制备生物型肥料增效剂的方法

权利要求书

1.甲基营养芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)菌株BT1301，于2013年10月9日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2013462。 

2.用权利要求1所述甲基营养芽孢杆菌BT1301发酵生产γ-聚谷氨酸及其制备生物型肥料增效剂的方法，其特征在于，用甲基营养芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BT1301CCTCC M2013462做出发菌株，进行斜面菌种活化、菌种液体摇瓶活化和液体深层发酵三级培养： 

斜面菌种活化：将培养好的保藏斜面种(Bacillus methylotrophicus BT1301 CCTCC M2013462)划线于新配制的LB斜面上，LB斜面组成如下：蛋白胨8～12g、酵母膏3～8g、氯化钠9～11g、琼脂15～22g、水1L，pH值6.5～8.0，121℃灭菌20min，培养条件为：培养温度33℃～37℃，培养1～4d； 

菌种液体摇瓶活化：将上述斜面菌种接种于液体LB活化培养液中，液体LB活化培养液组成如下：蛋白胨8～12g、酵母膏3～8g、氯化钠9～11g、水1L，pH值6.5～8.0，500～1000mL三角瓶装液1/3，121℃灭菌20min；培养条件为：摇床转速180～250r/min，培养温度33℃～37℃，培养12～36h； 

液体深层发酵：液体深层发酵培养液组成如下：淀粉糖化液(淀粉水解糖的质量浓度10～200g/L)100～400mL/L、氯化钙0.3～0.8g/L、蛋白胨3～8g/L、谷氨酸钠30～60g/L、氯化钠9～15g、硫酸镁1～1.5g/L、磷酸二氢钾2～6g/L、硫酸锰0.005～0.08g/L；液体深层发酵罐为0.5～50立方米自动控制高密度发酵罐，装液量60％～85％，121℃灭菌20～30min；培养条件为：接种量0.5～5％、搅拌转速250～1000r/min、培养温度33℃～37℃，培养1～4d；得到深层发酵发酵液； 

所述生物型肥料增效剂是由深层发酵发酵液与二价离子无机盐组成。 

3.根据权利要求2所述的一种甲基营养芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸及其制备生物型肥料增效剂的方法，其特征在于，所述淀粉水解糖为利用木薯淀粉、甘薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉的一种或一种以上。 

4.根据权利要求2所述的一种甲基营养芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸及其制备生物型肥料增效剂的方法，其特征在于，所述二价离子无机盐是镁、铁或锌的无机盐中的一种以上。 

5.根据权利要求4所述的甲基营养芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸及其制备生物型肥料增效剂的方法，其特征在于，所述镁的无机盐包括硫酸镁、氯化镁、草酸镁的一种或一种以上；所述锌的无机盐包括硫酸锌、氯化锌、硝酸锌、磷酸锌的一种或一种以上；铁的无机盐包括硫酸亚铁、氯化亚铁、硝酸亚铁的一种或一种以上。 

6.根据权利要求2所述的一种甲基营养芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸及其制备生物型肥料增效剂的方法，其特征在于，所述生物型肥料增效剂由液体深层发酵发酵液:镁盐按质量百分比85～95:5～15组成；或由液体深层发酵发酵液:锌盐按质量百分比85～95:5～ 15组成；或由液体深层发酵发酵液:锌盐:镁盐:二价铁盐按质量百分比85～95:2～15:1～15:2～15组成。 

7.利用权利要求2-6之一所述的方法制得的生物型肥料增效剂粉剂，其特征在于，将权利要求2-6之一所述生物型肥料增效剂与硅藻土按1：1～2质量比混合、干燥制成粉剂。 

8.利用权利要求7所述的生物型肥料增效剂粉剂制得的生物型肥料增效剂复合肥，其特征在于，将将权利要求7所述生物型肥料增效剂粉剂、尿素、磷肥、钾肥和粘土按质量比1～5：20～87：5～60：5～60：2～20混合得到复合肥。