[发明专利]肝癌特异性GP73核心启动子及其筛选构建方法

权利要求书

1.肝癌特异性GP73核心启动子，其特征是为以下任意一种：

p-19/-413，其序列如SEQ ID NO：1所示；

p-19/-613，其序列如SEQ ID NO：2所示；

p-19/-677，其序列如SEQ ID NO：3所示；

p-19/-729，其序列如SEQ ID NO：4所示。

2.如权利要求1所述的肝癌特异性GP73核心启动子的筛选构建方法，其特征是包括如下步骤：

1）、用PCR方法，以人肝癌细胞Huh7的总DNA基因组为模板，使用GP73特异性引物，得到PCR产物为GP73启动子全长序列p-19/-2616，用Mlu I和Hind III双酶切与同样双酶切的pGL3-Basic质粒连接，得到pGL3-L2598质粒；

所述GP73特异性引物为p-19:(Hind III)和p-2616:(Mlu I)；

p-19:(Hind III)ACTAAGCTT CCGGCCTCCGCAGCGGCAAG，

p-2616:(Mlu I)CGACGCGT TAGTCCCACCACTCTCGA；

2）、以pGL3-L2598为模板，用携带Mlu I和Hind III酶切位点的不同的引物经PCR获得含有不同GP73片段长度的质粒，与Mlu I和Hind III双酶切的pGL3-Basic质粒连接，得到pGL3-L711、pGL3-L659、pGL3-L595、pGL3-L395质粒；

所述pGL3-L711质粒对应引物为p-19/p-729；

所述pGL3-L659质粒对应引物为p-19/p-677；

所述pGL3-L595质粒对应引物为p-19/p-613；

所述pGL3-L395质粒对应引物为p-19/p-413；

p-413:(Mlu I)CGACGCGT ATAAAGAAGGTAACGTGA；

p-613:(Mlu I)CGACGCGT GAATCTTCACTTTTTCCGTTG；

p-677:(Mlu I)CGACGCGT TCATCTGAGGCGCTGTTTCA；

p-729:(Mlu I)TGACGCGT CTCCGGGAGGTACGGCCTCA。

3.根据权利要求2所述的肝癌特异性GP73核心启动子的筛选构建方法，其特征是：所述步骤1）和步骤2）中的PCR体系均为：

PCR条件均为：94℃×45s，58℃×30s，72℃×1.5min。